致病性嗜水气单胞菌检验方法——GB 1

1范围 
  本标准规定了致病性嗜水气单胞菌的检验方法。 
  本标准适用于患病鱼类等易感动物及水样中致病性嗜水气单胞菌的分离、鉴定，也可用于送检菌株的鉴定。 
2 致病性嗜水气单胞菌检验程序 
  检验程序的流程示意图见附录C(提示的附录)。 
2.1 嗜水气单胞菌的分离 
2.1.1准备 
2.1门.1各种培养的制备方法见附录A(标准的附录)。 
2.1.1.2各种试剂的制备方法见附录B(标准的附录) 
2.1.2 待检样本 
    待检样本可包括病料、水样及送检菌株，病料既可是无菌采取的易感动物的肾、肝、脾等未污染病料，也可是粪便或病变皮肤等污染病料，如样本为菌株，应先接种于普通肉汤(见附录A中A1),28℃培养24h，再划线接种于普通琼脂平板(见附录A中A2)，使之形成单个菌落，以供鉴定用。 
2.3 分离 
2.1.3.1未污染病料的分离 
2.1.3.1.1接种环(铂金耳)火焰灭菌，冷却。 
2.13.1.2 用接种环蘸取病料 
2.1.31.3划线接种于普通琼脂平板。 
2.1.3.1.4 28℃培养24h。 
2.13.2 污染病料的分离 
2.1.3.2.1接种环(铂金耳)火焰灭菌，冷却。 
2.1.3.2.2用接种环蘸取病料。 
2.1.3.2.3接种于RS琼脂平板(见附录A中A3), 
2.1.3.2.4 28℃培养24h。
2.1.3.3 水样的分离：
2.1.3.3.1用孔径为0.2pm的硝酸纤维素微孔滤膜过滤水样。 
2.1.3.3.2取出滤膜，置含有灭菌碱性蛋白陈水(见附录A中A4)的试管中。 
2.1.3.3.3 28℃培养24h。 
2.1.3.3.4划线接种于普通琼脂平板。 
2.1.3.3.5 28℃培养24h。
2.2嗜水气单胞菌的鉴定 
2.2.1菌落形态 
    嗜水气单胞菌在普通琼脂平板上。28-C培养24h后的菌落为光滑、微凸、圆整、无色或淡黄色，有特殊芳香气味 
2.2.2 氧化酶试验 
2.2.2.1用铂金耳挑取普通琼脂平板上单个菌落少许。 
2.2.2.2涂布于浸有1%盐酸四甲基对苯胺(见附录B中BI)的滤纸片上。 
2.2.2.3 10s内观察细菌涂布处的颜色。 
2.2.2.4 若细菌涂布处出现红色，判为阳性。 
2.2.2.5嗜水气单胞菌应为阳性。 
2.2.3AHM鉴别培养 
2.2.3.1用铂金耳挑取普通琼脂平板上氧化酶试验阳性的单个菌落少许。 
2.2-3.2 穿刺接种AHM鉴别培养基(见附录A中A5) 
2.2.3.3 37C培养24h。 
2-2-3.4 嗜水气单胞菌的表现为:顶部仍为紫色，底部为淡黄色;细菌沿穿刺线呈刷状生长，即运动力阳性;部分菌株顶部呈黑色。    
   

 

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