致病性嗜水气单胞菌检验方法——GB 2

2.2.4 吲哚试验 
2.2.4.1在长有细菌的AHM鉴别培养基顶部，滴加3-4滴Kovacs试剂(见附录B中B1), 
2.2-4.2若沿试管内壁出现红色环者，表明产生叫噪，判为阳性。 
2.2.4.3嗜水气单胞菌应为阳性。 
2.2.5 革兰氏染色 
2.2.5.1在一干净载玻片上滴加一滴蒸馏水。 
2.2.5.2用铂金耳取AHM鉴别培养基表面菌落少许。 
2.2-5,3在载玻片上与蒸馏水混合并均匀涂布。 
2.2-5.4 自然干燥，火焰固定。 
2.2.5.5加草酸钱结晶紫染液(见附录B中B2)染1min-2min, 
2.2-5.6 流水冲洗。 
2.2.5.7加革兰氏碘液(见附录B中B3)作用1min-2min, 
2.2-5.8流水冲洗。 
2.2.5.9加复红酒精染液(见附录B中B4)染50s-60s, 
2.2.5.10流水冲洗。 
2.2.5.11干燥，镜检。 
2.2.5.12 嗜水气单胞菌应为革兰氏阴性短杆菌。 
2.2.6 糖发酵试验 
2.2.6.1用铂金耳取AHM鉴别培养基表面菌落少许。 
2.2-6.2分别接种葡萄糖、蔗糖、阿拉伯搪、七叶昔及水杨昔等5种糖发醉试验管(见附录B中B5)。 
2.2.6.3 28℃培养24h, 
2.2-6.4 凡试验管颜色从紫色变为黄色，表明细菌可发酵该种糖类，判为阳性。 
2.2.6.5嗜水气单胞菌可发酵以上5种糖类。 
2.3嗜水气单胞菌致病性鉴定 
2.11脱脂奶平板试验 
2.3.1.1用铂金耳取AHM鉴别培养基表面菌落少许 
2.3.1.2 接种划线于1%脱脂奶蔗糖胰蛋白脉平板(见附录A中A6)。
2.3.1.3 28℃培养24h, 
2.3.1.4 若菌落周围出现清晰、透明的溶蛋白圈，判为阳性 
2.3.2 斑点酶联免疫试验 
2-3-2.1用铂金耳取AHM鉴别培养基表面菌落少许。 
2.3-2-2接种蔗糖胰蛋白陈肉汤(见附录A中A7), 
2.3-2.328℃摇床(30r/min)培养48h。 
2.12.4 10000r/min离心10min，取上清。 
2.3.2.5用微量加样器取5uL点样于硝酸纤微素膜光面。 
2.3.2.6 37℃烘干。 
2.3.2.7 N20%脱脂奶中，37℃封闭1h, 
2.3.2.8用含吐温-20的磷酸盐缓冲液(见附录B中B6)洗5次，每次2min 
2.3.2.9置1：50兔抗嗜水气单胞菌蛋白酶抗血清中，37℃作用1h。 
2.3.2.10用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次2min。
2.3.2.11置1：10酶标羊抗兔抗血清中，37℃作用1h。
2.3.2.12 用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次2min。 
2.3.2.13加3,3一二氨基联苯胺一过氧化氢(见附录B中B7)中显色。 
2.3-2-14 待斑点明显后，用去离子水终止显色。 
2.3-2-15 设无菌肉汤作阴性对照。 
2.3.2.16 以出现明显棕色斑点者判为阳性。    
   

 

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