食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验2——GB

6.操作步骤
6.1增菌以无菌操作取检样25g（ml)，加入装有225mLGN增菌液的广口瓶内，固体食品用均质器以8000r/min一10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6——8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
6.2分离和初步生化试验
6.2.1取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板一个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板一个，于36℃培养18h——24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三搪铁琼脂和葡萄糖半固体各一管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18h——24h，分别观察结果。
6.2.3下述培养物可以弃去：a）在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；b）在18h——24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；c）不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d）产气的培养物．e）有动力的培养物；f）产生硫化氢的培养物。
6.2.4凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体），无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。
6.3血清学分型和进一步的生化试验
6.3.1血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用Al、AZ、B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1——15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～工2型多价血清及各型因子血清检查。
6.3.2进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖钱，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱梭酶，pH7.2尿素，氰化钾（KCN）生长，以及水杨苷和七叶苷的分解。除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做5％乳糖发酵，甘露醇、棉子糖和甘油的发酵和靛墓质试验。志贺氏菌属四个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。   
   

 

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