食品卫生微生物学检验产气英膜梭菌检验2——GB

6、操作步骤
6.1活菌计数培养
6.1.1按无菌操作称取食品检样25g（mL）放人均质器中，加O.1％蛋白陈水225ml，低速搅动1min——2oin，使之均质化，作为1：10稀释液。
6.1.2以上述1：10稀释的均质液按1mL加0.1％蛋白陈水9ml做成10（-2）——10（-6）的系列稀释液。
6.1.3吸取各稀释液1ml分别放人两个灭菌平皿内。每个平皿浇注约50℃的SPS琼脂15ml——20ml，仔细转动平皿，使稀释液和琼脂充分混匀。
6.1.4上述琼脂平板凝固后，倒置于厌氧培养装置内，于36℃士1℃培养24h。
6.1.5选取长有30个～300个黑色菌落的平板，计数黑色菌落数。
6.2确证试验
6.2.1由平板上任取10个黑色菌落，分别按种FT培养基，于36℃士1℃培养18h—24h。
6.2.2用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检。产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形穿抱，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。
6.2.3角接种环（针）穿刺接种动力一硝酸盐培养基，于30℃士1℃培养24h，观察接种线的生长情况，判断有另动力。然后，滴加甲蔡胺液和对氨基苯磺酸液各0.5mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
6.2.4取生长旺盛的FT培养液1mL接种于含铁牛乳培养基，在46℃水浴中培养2h后观察有无“暴烈发酵”现象，5h内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵，现象，但培养基不变黑。
6.2.5用接种环取FT培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平板至少可接种10点），于30℃士1℃厌氧培养24h，观察接种点的变化。产气英膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的棍浊带6.3菌数计算根据黑色菌落的计数（6.1.5）和确证试验的结果（6.2），计算每克（毫升）食品检样的含菌数。
例如：10（-4）稀释液的平板长有黑色菌落l00个，而供做确证试验的10个菌落中有7个被确证为产气英膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含产气荚膜梭菌数为：100*0.7*10（4）=7*10（5）   
   

 

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