食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验2——GB

6、操作步骤
6.1菌数测定以无菌操作将检样25g（mL)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10（-1）——10（-5）的稀释液按GB/T4789.2测定。取各稀释液0.1mL，接种在两个选择性培养基一甘露醉卵黄多粘菌素（MYP）琼脂培养基上，用L形棒涂布于整个表面，置36℃士1℃培养12h——20h，选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色（表示不发酵甘露醇）周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。计数后，从中挑取五个此种菌落做证实试验，根据证实的蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（毫升）样品中所含蜡样芽胞杆菌数。例如：将0.1ml 10（-4）样品稀释液涂布于MYP平板上，其可疑菌落为25个，取五个鉴定，证实四个菌落为蜡样芽胞杆菌，则1g(mL）检样中所含蜡样芽胞杆菌数为：25*（4/5）*100000=20000006.2分离培养取检样或稀释液划线分离于选择性培养基（MYP）上，置37℃培养12h～20h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落（见6.1）接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验
6.3证实试验
6.3.1形态观察本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1um或1um以上，芽胞垒卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏子一端．6.3.2培养特性本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化；在普通琼脂平板上其菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不整齐。
6.3.3生化性状及生化分型
6.3.3.1生化性状本菌有动力；能产生卵磷脂酶和酩蛋白酶；过氧氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；常能液化明胶和使硝酸盐还原。在厌氧条件下能发酵葡萄糖。
6.3.3.2生化分型根据蜡样芽胞杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，分成不同型别。
6.3.4与类似菌鉴别
本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似．但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下：取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自然千燥后用弱火焰固定，加甲醉于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加0.5％碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气维持1.5min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分漂洗、晾干、镜检。在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体（如未形成游离穿胞，培养物应放室温再保存ld—2d后检查），如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。   
   

 

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