嗜酸乳杆菌酸耐受性的研究_2

2 材料和方法
2.1材料
2.1.1菌株来源
嗜酸乳杆菌 （Lactobacillus acidophilus），代号为ATCC4356；La-IM1、La-IM2 和La-IM3 分离自内蒙古传统发酵乳制品。
2.1.2仪器设备
紫外分光光度计、光学显微镜 （OLMPUS ）、梅特勒—托利多Delta320pH 计、电热手提式压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱、超净工作台等。
2.1.3培养基
RS培养基[9]:5g/L酵母提取物，10g/L蛋白胨，10g/L牛肉膏，20g/L葡萄糖，2g/L K HPO ，2g/L柠檬酸二铵，5g/L 乙酸钠，0.58g/L MgSO .7H2O ，0.25g/L MnSO .4H2O, 调pH6.2～6.4，固体需加15g/L琼脂粉，121℃灭菌15min。
2.2方法
2.2.1菌种的活化与分纯
用接种环挑取少量冷冻干燥保藏的菌粉，接种于液体MRS 培养基中37℃，24h培养，连续传代两次进行活化；将活化后的菌种于MRS 固体培养基上划线培养，37℃，48h 培养；挑取半个单菌落染色镜检，如果镜检未发现杂菌，则用接种环挑取另外半个单菌落接种于液体MRS 培养基中培养并保存备用；如果镜检发现杂菌，则用接种环挑取单菌落于MRS 固体培养基上划线培养，再镜检，直至分纯。
2.2.2 4株菌酸耐受性的实验
将4 株嗜酸乳杆菌以3% 的接种量接种于MRS 液体培养基中进行传代一次。用盐酸调节MRS 液体培养基的pH 值为2.5，吸取4.5mL 于4 个试管中，置于高压灭菌锅内进行121℃、15min灭菌。按照 10%的添加量吸取500 μL菌液分别加入到4个试管中作用3h。作用结束后，将试管在漩涡混匀器上进行震荡混匀，平板涂布进行活菌计数。 
2.2.3嗜酸乳杆菌La-IM2生长曲线的测定
将嗜酸乳杆菌La-IM2 按3％的接种量，接种到装有300mL液体培养基的锥形瓶中，37℃进行培养。每隔2h在无菌超静工作台中取出20mL 用于测OD600 和pH 值，直至24h，然后绘制生长曲线。 
2.2.4嗜酸乳杆菌La-IM2在不同pH值条件下的酸耐受性实验
用盐酸调节PBS缓冲液的pH值分别为 1.5、2.5、3.5、4.5、7，然后将嗜酸乳杆菌La-IM2 按 10％的接种量接种于以上pH 值的PBS 缓冲液中，在37℃下进行作用，作用时间分别为1.5h和3h，随后将试管在漩涡混匀器上进行震荡混匀，平板涂布进行活菌计数。 
2.2.5活菌计数方法 
每个样品取3 个平行，用PBS 缓冲液 （pH  7）逐步稀释5个梯度。以MRS 固体培养基为计数培养基，于37℃培养48～72h后平板计数[10]，选择平板上菌落数在30～300个菌落的平板，统计菌落数，最后求取平均值。    
   

 

上一篇：嗜酸乳杆菌酸耐受性的研究_1

下一篇：嗜酸乳杆菌酸耐受性的研究_3