酵母菌的培养方法

   酵母菌是一些单细胞真菌。酵母可以通过出芽进行无性生殖，也可以通过形成子囊孢子进行有性生殖。无性生殖即在环境条件适合时，从母细胞上长出一个芽，逐渐长到成熟大小后与母体分离。在营养状况不好时，一些可进行有性生殖的酵母会形成孢子，在条件适合时再萌发。
   培养酵母最适pH 值为pH4.5-5.0。最适生长温度一般在28℃~30℃之间。
   酿酒酵母，用到的培养基有：
1、酵母完全培养基YPD：酵母提取物10g，蛋白陈20g,葡萄糖20g，定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。
2、SC（合成完全培养基）培养基（用于筛选酵母转化子）：YNB（不含氨基酸的酵母氮源） 6.7g，葡萄糖20g，加入相应的氨基酸，定容至1L。加入1.5%琼脂粉则成为固定培养基。
    由于葡萄糖和氨基酸，灭菌是用115度，30min的灭菌条件。
    液体摇菌时一般在30度下摇24－30min，就可以，固体培养一般在30度下要3－5天。
   
    酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤：
    取1L酵母，诱导完后，离心（centrifugation）收菌体，称湿重，用蛋白（protein）纯化buffer悬浮菌体，重量（g）：buffer体积（毫升）＝1：1－－1：2。用注射器将菌液加入液氮中，控制加入速度，使得菌液进入液氮中后形成小颗粒,太快容易结成块。将菌体液氮颗粒转入高速打碎器（用的是打碎草药的机器，RMB600）中，注意不要将多余液氮倒入，大约2－3万转/分破碎1分钟，菌体颗粒应该成粉末状。倒出粉末，37度水浴融化后，再用注射器加入液氮中，重复上述步骤，重复3次。高速（20000rpm，4度30分）离心（centrifugation）收上清，如上清杂质较多，需要多离几遍，上清中目标蛋白（protein）纯化同E.coli. 
  

 

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