细菌内毒素的提取

   内毒素即革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖（LPS），存在于细菌的细胞外膜，当细菌死亡后，细胞膜破裂就释放出来，由核心多糖、侧翼多糖及脂A组成，体积微小，其粒径约在1~ 5毫微米（Nanotex nm，为千分之一微米1×10－3m m），一般认为其分子量在1000以上。具有水溶性、不挥发性、不带有正电性和负电性等特征。其耐热性，一般在60℃加热1小时无影响，100℃不裂解，120℃加热四小时能破坏98％，180－200℃干热2小时或250℃加热半小时才能完全破坏。
   内毒素生物学活性多种多样，在体内作用错综复杂，参与了机体许多病理生理反应过程。内毒素可以诱发机体炎症因子的过度释放，导致系统性炎症反应综合症、多器官衰竭，死亡率很高，占死因的50－70%。
1、从大肠杆菌中提取粗制内毒素，用的方法是反复加热、冻存法，但是效果不是理想。具体方法是将大肠杆菌在2个大气压下（因具体条件限制，可以在1.2个气压左右），蒸汽灭菌30min，后－20度冻存24小时，反复3次，即可。
2、目前，市面上有卖从转染后的质粒DNA溶液中提取内毒素的试剂盒（因为，转染后质粒DNA溶液若含有内毒素，可能导致转染的失败），其也可以从细菌死亡裂解后的溶液中提取内毒素。
3、传统的内毒素提取方法就是加热菌液或用其它方法使细菌裂解，然后用特殊石棉滤板过滤即可。
4、纯化重组蛋白的时候经常需要去除内毒素，当然同样的操作也可以提取内毒素。
5、如果做正规的内毒素实验可以购买LPS O111：4或O55：5。

   

 

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