细菌的两种鞭毛染色法

1.镀银法染色
（1）清洗玻片  选择光滑无裂痕的玻片，最好选用新的。为了避免玻片相互重叠，应将玻片插在专用金属架上，然后将玻片置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
（2）菌液的制备及制片：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上（培养基表面湿润，斜面基部含有冷凝水）连续移接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中培养12—16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌液数环，移至盛有1—2mL无菌水的试管中，使菌液呈轻度混浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。然后，吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。涂片放空气中自然干燥。
    用于鞭毛染色的菌体也可用半固体培养基培养。方法是将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中，待凝固后在平板中央点接活化了3-4代的细菌，恒温培养12-16h后，取扩散菌落的边缘制作涂片。
（3）染色
①滴加A液，染4—6min。
②用蒸馏水充分洗净A液。
③用B液冲去残水，再加B液于玻片上，在酒精灯火焰上加热至冒气，约维持0.5—1min（加热时应随时补充蒸发掉的染料，不可使玻片出现干涸区）。
④用蒸馏水洗，自然干燥。
（4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。
结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
2.改良Leifson染色法
（1）清洗玻片法同1。
（2）配制染料  染料配好后要过滤15-20次后染色效果才好。
（3）菌液的制备及涂片
①菌液的制备同1。
②用记号笔在洁净的玻片上划分3—4个相等的区域。
③放1滴菌液于第一个小区的一端，将玻片倾斜，让菌液流向另一端，并用滤纸吸去多余的菌液。
④干燥  在空气中自然干燥。
（4）染色
①加染色液于第一区，使染料覆盖涂片。隔数分钟后再将染料加入第二区，依此类推（相隔时间可自行决定），其目的是确定最合适的染色时间，而且节约材料。
②水洗：在没有倾去染料的情况下，就用蒸馏水轻轻地冲去染料，否则会增加背景的沉淀。
③干燥：自然干燥。
（5）镜检  先低倍观察，再高倍观察，最后再用油镜观察，观察时要多找一些视野，不要企图在1-2个视野中就能看到细菌的鞭毛。
结果：菌体和鞭毛均染成红色。
（五）注意事项
1.镀银法染色比较容易掌握，但染色液必须每次现配现用，不能存放，比较麻烦。
2.Leifson染色法受菌种、菌龄和室温等因素的影响，且染色液须经15-20次过滤，要掌握好染色条件必须经过一些摸索。
3.细菌鞭毛极细，很易脱落，在整个操作过程中，必须仔细小心，以防鞭毛脱落。
4.染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
   

 

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