影响试管苗继代培养的因素及解决措施

             影响试管苗继代培养的因素及解决措施 
  1、影响试管苗继代培养的因素及解决措施
    当试管苗的瓶内长满并长到瓶塞，或培养基利用完成时就要转接，进行继代，可迅速得到大量试管苗，以便到一定数量时进行移栽。能否保持试管苗的继代培养，是能否得到大量试管苗和能否用于生产的重要问题。
    （1）驯化现象 
    在植物组织培养的早期研究中，发现一些植物的组织经长期继代培养，发生一些变化，在开始的继代培养中需要生长调节物质的植物材料，其后加入少量或不必加入生长调节物质就可以生长，此现象就叫作“驯化”。如在胡萝卜薄壁组织培养过程中，逐渐消耗了母体中原有器官形成有关的特殊物质。如初代中加入10-6mol/L IAA，才能达到最大生长量，但经多次继代培养后，在不加IAA的培养基上也可达到同样生长量，一般约在一年以上，或继代培养10代以上。
    但并不是出现这种所谓的驯化现象就好，有时长期的“驯化”现象会得到适得其反的结果，如卡德利亚兰实生苗在长期的加香蕉的培养基中继代，最后造成只长芽不长根，芽的增长倍数很高，但芽又细又弱，这时在加入生长素的培养基中培养，几次继代可长出较多的根。
    （2）形态发生能力的保持和丧失
    在长时期的继代培养中，材料自身内部要发生一系列的生理变化，除了前面讲的“驯化”现象外，还会出现形态发生能力的丧失。不同的植物其保持再生能力的时间是不同的，而且差异很大，在以腋芽或不定芽增殖继代的植物中，在培养许多代之后仍然保持着旺盛的增殖能力，一般较少出现再生能力丧失问题。
    一般认为分化能力衰退主要有三个因素：
    第一，愈伤组织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的成器官中心（分生组织），当重复继代会逐渐减少或丧失，这意味着不能形成维管束，只能保持无组织的细胞团。也有人认为在继代培养过程中，逐渐消耗了原有的与器官形成有关的特殊物质。为什么有的植物出现形态发生能力丧失的现象，而在另一些植物中，形态发生能力又能很好保持？其原因还有待进一步研究。
    第二，形态发生能力的减弱和丧失，也可能与内源生长调节物质的减少或丧失有关，如胡萝卜和菘兰。
    第三，也可能是细胞染色体出现畸变，数目增加或丢失。
    （3）影响继代培养的其他因素
    （1）植物材料的影响 不同种类植物，同种植物不同品种，同一植物不同器官和不同部位继代繁殖能力也不相同。一般是草本＞木本；被子植物＞裸子植物；年幼材料＞老年材料；刚分离组织＞已继代的组织；胚＞营养体组织；芽＞胚状体＞愈伤组织。
    （2）培养基及培养条件 培养基及培养条件适当与否对能否继代培养影响颇大，故常改变培养基和培养条件来保持继代培养，在这方面有许多报道，如在水仙鳞片基部再生子球的继代培养中，加活性炭的培养基中再生子球比不加活性炭的要高出一至几倍。胡霓云等报道，在MS培养基初次培养的桃茎尖，若转入同样的MS培养基则生长不良，而转入降低氨态氮和钙，增加硝态氮、镁和磷的培养基中则能继代繁殖。
    （3）继代培养时间长短 关于继代培养次数对繁殖率的影响的报道不一。有的材料长期继代可保持原来的再生能力和增殖率，如葡萄、黑穗醋栗、月季和倒挂金钟等。有的经过一定时间继代培养后才有分化再生能力。潘景丽等进行沙枣愈伤组织继代培养6次后，才分化苗，保持二年，仍具有分化能力。而有的随继代时间加长而分化再生繁殖能力降低，如杜鹃茎尖外植体，通过连续继代培养，产生小枝数量开始增加，但在第四或第五代则下降，虽可用光照处理或在培养基中提高生长素浓度，以减慢下降，但无法阻止，因此必须进行材料的更换。
    （4）季节的影响 有些植物材料能否继代与季节有关。如水仙取6、7月份的鳞茎，因夏季休眠，生长变慢，8月休眠后，生长速度又加快。百合鳞片分化能力的高低，表现为春季＞秋季＞夏季＞冬季。球根类植物组织培养繁殖和胚培养时，就要注意继代培养不能增殖，是因其进入休眠，可通过加入激素和低温处理来克服。唐菖蒲在MS培养基上得到的球茎，移植于MS培养基中，无机盐和糖浓度减半，并增加萘乙酸用量，可以防止继代中的休眠。
    一般能达到每月继代增殖3倍—10倍，即可用于大量繁殖，盲目追求过高增殖倍数，一是所产生的苗小而弱，给生根、移栽带来很大困难；二是可能会引起遗传性不稳定，造成灾难性后果。  
   

 

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