由于多数病毒在细胞外较快灭活，特别是在炎热季节，披膜病毒、正粘病毒和副粘
病毒等在外界环境以及腐败的动物尸体中迅速死亡，所以只要将污染的设备或房舍闲置几天，即可达到自然消毒目的。痘病毒和某些疱疹病毒在外界环境中的抵抗力较强，在有蛋白质性保护层例如痂皮时，更能长期活存，这就要求应用有效的消毒剂。病毒学实践中经常应用烧碱等作环境消毒剂，实验室内则常应用高锰酸钾、双氧水和次氯酸盐等氧化剂。福尔马林也有较强的消毒作用，但作用较慢，且因对鼻、眼等粘膜具有较大的刺激性和不良气味，故不被经常采用。石炭酸和煤酚类消毒剂如来苏儿，并不属于特别有效的病毒消毒剂，通常需用较大浓度，才能达到完全消毒的目的。由于国内供应较多，且价格便宜，来苏儿一直在被广泛应用，但不宜用于口蹄疫病毒。对于不耐酸的病毒，实验室内较常应用1%盐酸溶液浸泡玻璃和塑料制品，如吸管和微量培养板、滴定板等。环氧乙烷等气体消毒剂由于有较强的穿透作用，可以用于无菌室、污染的工作服、实验器材、超净工作台等的消毒。影响消毒剂作用效果的因素很多，如消毒剂的浓度、消毒环境的温度、湿度、pH、病毒的种类及有无有机物存在等，因此在实际消毒中，要根据病毒的种类，选择合适的消毒剂和浓度，控制环境条件，方能取得理想的消毒效果。在科学研究和生产实践中，经常还要观察和比较消毒剂的杀病毒效果，测定消毒后病毒被灭活的程度。为此，必须进行杀病毒试验。其一般程序是将经过处理的样品接种于鸡胚、组织培养细胞或敏感的动物，培养后观察有无残留病毒生长，并与对照样本相比较，求出病毒灭活的水平。至于病毒灭活到何种程度才算消毒合格，目前国内外都没有统一标准。国外一般要求消毒后病毒滴度比消毒前降低3个log(3个数量级)。苏格兰农业部门规定，用口蹄疫病毒和鸡新城疫病毒进行消毒试验时，要求消毒后病毒的滴度比消毒前滴度降低4个log。我国习惯用灭活率来表示消毒效果，灭活率应达到999%～9999%。〖JZ〗灭活率=〖SX(〗消毒前病毒量-消毒后病毒量〖〗消毒前病毒量〖SX)〗测定消毒剂杀病毒作用的试验，国内外迄今没有统一的标准，下面介绍几种应用较多的方法。〖BT4〗1.布片载体消毒试验刘育京等在观测流感病毒(疫苗株)消毒效果时曾应用这种试验。其方法是将脱脂布片(棉布或亚麻布)浸入适当稀释的流感病毒液中30分钟后，取出置37℃温箱干燥15分钟，放冰箱备用。试验时将试验组布片按预定时间暴露于消毒剂，对照组布片不暴露于消毒剂。然后按预定时间回收病毒：方法是将每个布片放入5ml灭菌肉汤或生理盐水(含适当浓度的可中和消毒剂的化学物质及青、链霉素各100U/ml或100μg/ml)，用力吹打80次，洗下样片上的病毒。将样片的洗液作系列10倍稀释，然后各稀释度分别吸取02ml，接种鸡胚，每个稀释度接种鸡胚4只；将接种的鸡胚放37℃温箱，培养48～72小时；用1%鸡红细胞悬液与鸡胚囊液作血凝试验，有阳性者说明鸡胚被感染。本试验除设置未经消毒处理的病毒样片对照外，还应设置经消毒处理的未感染病毒样片对照、未接种样片洗液的鸡胚对照和细胞毒性对照——用消毒剂和中和剂混合液接种鸡胚。若作定性试验，可用样片洗液的原液接种鸡胚，以消毒组样片接种的鸡胚全部阴性为消毒合格。但试验应重复5～10次，以求得稳定的结果。若作定量分析，可求出对照样片和消毒样片各自的半数鸡胚感染剂量(EID50)(见本书第十四章)，并计算出病毒灭活率。〖BT4〗2.载体环消毒试验1964年，Lorenz和Fenn用这种试验方法检查了几种消毒剂对鸡新城疫病毒的灭活作用。具体方法是取20个载体不锈钢环放入20ml澄清的病毒尿囊液中，浸泡15分钟后取出，放于瓷盘内，于37℃干燥20～60分钟备用。试验时，将消毒剂作系列稀释，每管10ml，放于20℃；每管放入载体环一只，间隔时间为1分钟，共10只染有病毒的载体环被浸入消毒液内；在第一个载体环放入后10分钟，将其取出，放入1ml营养肉汤管内(成含有适当浓度的可中和消毒剂的物质)，1分钟后，将第二只载体环转移入肉汤管内，如此直至10只载体环全部转移入肉汤管，肉汤管也放在20℃下。最后一个载体环取出后，立即取每个肉汤洗液01ml接种10～20天的鸡胚，每管肉汤接种6个鸡胚，应在15分钟内将60个鸡胚接种完毕。接种后每天在照蛋灯下检蛋，接种24小时内死亡的鸡胚应从试验中剔除。从接种后24小时到120小时的96小时内，若有鸡胚发生死亡，则可判断为该浓度不能灭活病毒。若全部鸡胚都存活，则该稀释度可被判断为消毒有效的稀释度。这一试验不仅用于能引起鸡胚死亡的病毒作试验。而且能引起鸡胚绒毛膜囊膜形成痘斑和能阻止鸡胚发育的病毒也可进行此试验。该方法经改进后，也可用于检查消毒剂对适于组织培养的其它病毒的消毒效果。但Wright等用水泡性口炎病毒进行本试验时，发现载体环传染病毒的回收率低。Chen也发现，杀菌性试验中用的不锈钢环载体不能携带足够浓度的单纯疱疹病毒，所以不能用于杀病毒试验。〖BT4〗3.漂浮载体消毒试验Groen等设计了“杀病毒剂漂浮技术”，测定甲醛和戊二醛以及次氯酸钠等的杀病毒效力，取得较好结果。据认为还可用于其它对细胞培养物毒性很强的消毒剂的杀病毒效果试验。方法是将2%的琼脂糖块切成约1cm3的小块，置于载玻片的一端。将已知量的病毒悬液滴于琼脂糖块的表面，任其扩散、蒸发，直至表面完全干燥，此过程约需10分钟。随后加二滴溶于二氯乙烷的05%(W/V)聚乙烯醇缩甲醛(BDH)，待其停留几秒钟，将载玻片垂直立于吸水纸上，以除去多余的聚乙烯醇缩甲醛。干燥后用锐利的刀片修切琼脂糖块的边缘。随后轻轻浸入消毒剂溶液中。这样，一个含有病毒的薄膜片就释放并“漂浮”于消毒液的表面。记录消毒剂与病毒接触的时间。随后用一根封口的毛细吸管将该薄膜片从消毒剂溶液中取出，轻轻接触1支灭菌试管的管壁，以除去多余的消毒剂。随后将薄膜片转移到1ml的组织培养液中，再用封口毛细吸管将薄膜片弄碎，使剩余的病毒粒子释放到液体中，并用之接种细胞培养物，滴定残活的病毒。对照组用组织培养液代替消毒剂溶液。4.水悬浮消毒试验该试验不借助于其它固相载体，直接将试验的消毒剂溶液与未经稀释的病毒悬液01ml相混合(有些研究中将病毒稀释至1：100)，在室温下接种1、3、5和10分钟后，用肉汤将病毒消毒剂混合物作10倍连续稀释，至病毒滴度的终点。未用消毒剂作用的对照组也如此稀释。因为消毒剂对组织培养细胞有毒性，所以测定从10－３稀释度开始，每个稀释度取01ml(用10－３～１０-7或10-8稀释度)接种培养。对流感病毒，接种孵育10天的鸡胚尿囊腔，培养40小时以后用血凝试验检查尿囊腔有无病毒存在。对单纯疱疹病毒、牛痘病毒和腺病毒，用其稀释液接种HeLa细胞，于37℃培养4～7天后，观察细胞病变。测定试验组的病毒滴度，并与对照组相比较，即可计算出消毒剂对各该病毒的杀灭作用及有效浓度。
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