灯盏花组培快繁与植株再生
录入时间:2009-6-23 17:16:24
来源：青岛海博
摘要〔 目的」建立较为系统的灯盏花组培体系，培育、壮大和发展灯盏花这一独具特色和优势的产业。【 方法〕 以灯盏花（Erigeron bre –viscapus）的叶片为外植体，用不同浓度的激素6 一BA 、2 , 4 一D 、KT 和NAA 对其进行愈伤组织的诱导和再生植株的研究。【 结果〕 诱导愈伤组织最佳的培养基是MS + KT0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg/L 和MS + 2 , 4 一D0.5mg / L + 6 一BA0.5mg/L ，诱导率为100 % ；二者相比，前者长出的愈伤组织较为紧密，而后者松散性好；MS + 6 一BA 0.5mg/L + l0 ％香蕉汁是诱导芽最佳的培养基，达87 % ；加入0.3mg/LNAA 的l /2Ms 培养基对生根最有利，生根率达83 ％。「结论」生长素与细胞分裂素的合理配比有利于快速构建灯盏花培养体系。
关键词：灯盏花；叶片；组织培养；植株再生
灯盏花，属菊科（ComPositae ）飞蓬属（Erigeron ）植物，产于湖南、广西、贵州、四川、云南、西藏等省区，常见于海拔1200~3500m 的中山和亚高山开阔山坡、草地、林缘，是一种民间常用药用植物。始载于《 滇南本草》 ，临床主要用于治疗高血压、脑栓塞、多发性神经炎、慢性珠网膜炎等脑血管意外所致的瘫痪症，总有效率为95.8 %，被列为云南重点培育的五大特色云药之一。灯盏花是一种具有重要经济价值的药用植物，20 多年来，野生灯盏花被大量采挖，资源不足成为制约灯盏花药业发展的瓶颈叫。灯盏花有性繁殖效率低，其种子形成数量虽然很多，但种子瘦小、瘪粒多，不能满足大面积药材栽培对种苗的需求，目前对灯盏花的研究大多数仅限于它的药用价值及病害方面的研究川，对其组培的系统研究报道甚少。笔者以植株幼叶为外植体，对不同激素及其浓度对灯盏花愈伤组织、继代增殖和芽的分化及生根培养等方面进行了系统的研究，对建立较为系统的灯盏花组培体系，培育、壮大和发展灯盏花这一独具特色和优势的产业具有重要的理论价值和实际应用前景。
1 材料与方法
1.1 材料灯盏花，学名短草飞蓬。取灯盏花叶片。
1.2 培养方法① 诱导愈伤组织培养基：MS 十KT ( 0.5 、1.0 、3.0 ) + 2 , 4 一D ( 1.0 、5.0 、10.0 ) ；② MS + 2 , 4 一D ( 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 ) + 6 一BA ( 0.1 、0.2 、0.5 ) ；③ MS + 6 一BA 0.5 + NAA ( 0、0.1 、0.2 、0.5 ) ；④ 增殖培养基：MS + 2 , 4 一D 5.0 + KT 0.5 + 10 ％香蕉汁＋0.5 ％活性炭；⑤ 分化培养基：MS + 6 一BA 0.5 +IBA ( o 、0.1 、0.3 、0.5 ) + 10 ％香蕉汁；⑥ 生根培养基：l / 2MS + NAA ( 0.1 、0.2 、0.3 、0.4 、0.5 ）。上述培养基激素的浓度单位均为mg/L ，均添加2.5 ％蔗糖、0.65 ％琼脂，pH 5.8 ，培养温度25 ℃ ，光照度2000lx ，光照时间16 h/d 。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织的诱导
取灯盏花幼嫩叶片，表面冲洗干净，切成1~2cm2 耐的小块放人70 ％的酒精中消毒30s ，用0.1 % 的HgC12 溶液浸泡3 min ，无菌水冲洗3 次，然后接种到培养基① 一③ 中暗培养，每瓶接种30 个外植体。培养8d 后，叶片呈不同程度的变厚卷曲膨大，逐渐长出淡绿色颗粒状的愈伤组织，14d 出现大量的愈伤组织（图l ）。其中MS + KT 0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg / L 、MS + 2 , 4 一D0.51mg/L + 6 一BA 0.5m g/L 及MS 十6 一BA 0.5mg / L + NAA 0.lmg/L 诱导愈伤组织的出愈率均为100 % ，但是以MS 十6 一BA 0.5mg/L + NAA 0.lmg/L 生长势最好。
2.2 芽的分化待叶片边缘长出绿色的愈伤组织时，切取并转人培养基④ 中进行增殖培养，10d 为1 个继代周期，继代3 一4 次。选取生长较好的愈伤组织接种到培养基⑤ 上分化培养，放入光照培养室培养。愈伤组织在分化培养基上培养12d ，即可观察到愈伤组织的体积明显增大，25d 愈伤组织表层变绿且有小芽点长出，30d 有浅绿色的子叶出现，40d 后大量叶子从芽丛中生长形成无根苗丛（图2 ）。在诱导芽的分化过程中，以MS + 6 一BA 0.5mg/L 产生的芽最多。
2.3 根的形成
将不定芽转接在生根培养基⑥ 中，进行生根培养。6d 后有根原基生成（愈伤突起，表面附有少量白色小绒毛）。经2 次继代，18d 后无根苗下的愈伤片上布满大量根原基并有大量的根生成。根的生长速度为。．4mm/d 。其中生根最好的激素配比为1 / 2 MS 十NAA 0.3mg/L ，诱导生根率达83 ％以上（图3 ）。
2.4 炼苗及移栽
当大部分苗根长2 cm 以上时，打开瓶盖，炼苗3 一5d ，用镊子将苗轻轻夹出，用清水洗去基部残留的培养基，栽于腐殖土：珍珠岩，蛙石（2 : 1 :1 ）的基质中，保持80 ％一85 ％湿度，成活率达95 ％以上（图4 ）。
3 结论
以灯盏花的叶片为外植体，用不同浓度的激素6 一BA 、2 , 4 一D 、KT 和NAA 对其进行愈伤组织的诱导和再生植株的研究。结果表明，诱导愈伤组织最佳的培养基是MS + KT 0.5mg/L + 2 , 4 一D 10mg/L 和MS + 2 , 4 一D 0.5mg/L + 6 一BA 0.5mg/L ，诱导率为100 % ；二者相比，前者长出的愈伤组织较为紧密，而后者松散性好；Ms + 6 一BA 0.5mg／L 十10 ％香蕉汁是诱导芽最佳的培养基，达87 % ；加人0.3mg/L NAA 的1 / 2 MS 培养基对生根最有利，达83 ％。试验表明，生长素与细胞分裂素的合理配比有利于快速构建灯盏花培养体系。
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