东方百合茎尖组培技术研究
录入时间:2009-6-24 9:58:45
来源：青岛海博
摘要【目的〕 研究东方百合索蚌、元帅、西伯利亚茎尖分生组织分化，生产脱毒种苗。【 方法】 利用MS 培养基和外源激素，对东方百合品种进行茎尖组织培养。【结果】鲜片诱导小仔球的最适培养基为Ms 十6 - BA 1.0mg/L 十NAA 0.2mg/L 。茎尖诱导和分化的最适培养基为MS + 6 – BA1.0mg/L + NAA 0.5mg/L 。［结论〕 在百合种球产业化生产中，该方法是获得百合复壮原种的主要手段。
关键词：东方百合；鳞茎；茎尖培养；MS 培养基
东方百合在我国不少地方被引种栽培，在切花与盆花繁殖中，主要利用无性繁殖产生种球。由于长期使用营养体繁殖，东方百合的病毒感染程度很高，因而经常发生种球退化现象，严重影响了切花与盆花质量。目前，利用百合鳞片、胚等不同外植体进行组培分化出的试管苗，可以提高百合的繁殖系数，达到扩繁的目的。除了诱导不定芽外，还有诱导小鳞茎的报道叫。百合组培脱毒常用的外植体是百合茎尖，多数利用鳞片不定芽的茎尖作繁殖材料。1 个百合茎尖经初代培养可以分化出6 一10 个不定芽。再经继代培养，每个芽加d 左右又可分化出9 一10 个小芽。该方法在百合种球产业化生产中可以用于种球复壮，是获得复壮原种的主要手段。赵庆芳等对东方百合组培快繁技术进行了研究，但未涉及茎尖培养脱毒。笔者研究了东方百合茎尖的组培技术，旨在为规模化生产东方百合脱毒苗提供参考。
1 材料与方法
1.1 供试材料从江苏省球根花卉种质资源基因库（苏州农业职业技术学院园艺中心球根花卉种植圃）采集健壮的东方百合品种索蚌、元帅、西伯利亚植株的种球。
1.2 方法
1.2.1 鳞片消毒和接种。先剥掉种球外部已坏死或病菌感染严重的鳞片，然后取种球外面几层鳞片，用洗衣粉加水搅动洗涤10 min ，流水条件下冲洗2h ，晾干后放置备用。将清洗好的鳞片置于75 ％的酒精溶液中消毒0.5 min ，用无菌水冲洗1 次，再用0.1 ％升汞溶液消毒10 min ，无菌水冲洗5 次，用灭菌滤纸吸干水分。将消毒鳞片切成5mm2 大小，凸面朝上插人培养基，每个培养瓶接种1 个外植体，每种培养基接种50 份，进行初代培养。
1.2.2 不同激素组合对不同百合品种鳞片诱导小仔球形成的影响。设计的接种用MS 培养基及激素组合。培养基PH值为5.6 一5.8 ，蔗糖浓度为30g/ L ，培养温度（25 士2 ）℃ ，光照强度1500~2000lx ，每天照光16h 。培养一段时间后，定期观察接种到上述不同种类培养基上的鳞片分化仔球的情况，记录仔球分化数和直径，确定最适培养基用于茎尖诱导小仔球的继代培养。
1.2.3 不同激素组合对不同大小的茎尖分生组织诱导分化的影响。取经过初代培养的小仔球，在解剖镜下切取长度为0.2mm以下、0.2 一0.5mm及0.5 mm以上的3 种茎尖进行培养。根据上述鳞片分化仔球的试验结果，设计茎尖接种的培养基及激素组合培养基声值为5.6 一5.8 ，蔗糖浓度30g/L ，培养温度（25 士2 ）℃ ，光照强度1500一2000lx ，每天照光16h 。培养一段时间后，定期观察茎尖分生组织诱导分化的情况，记录生长点死亡数、形成明显愈伤组织的茎尖数、不定芽产生的茎尖数、平均每茎尖产生的不定芽数。
2 结果与分析
2.1 不同激素组合对不同百合品种鳞片诱导小仔球的影响3 个品种外植体块分别接种到4 种培养基上培养46d 后，观察统计不同培养基对仔球再分化的影响。由表1 可知：在② 号培养基中，索蚌仔球的每鳞片仔球分化平均数最高，仔球的平均直径虽相对较小，但适合提高仔球的繁殖系数；在① 号培养基中，仔球的每鳞片仔球分化平均数最低，有85 % 的鳞片形成明显的愈伤组织，说明有利于愈伤组织的诱导；在④ 号培养基中，形成的小仔球较大，但数量少；③ 号培养基中的小仔球数量和大小介于培养基② 和④ 之间，为诱导小仔球最适培养基。由表1 还可知，③ 号培养基诱导元帅小仔球的效果同诱导索蚌情况类似，为最适培养基，② 和③ 号差别球的效果最好。经比较可知，3 个品种分化程度差别不大，索较小，④ 和① 号不利于繁殖；② 号培养基诱导西伯利亚小仔蚌分化最好，西伯利亚分化最差。
3 小结与讨论
索蚌和元帅分化鳞片诱导小仔球的最适培养基为MS + 6 一BA10mg/L + NAAO.2mg/L ，西伯利亚为Ms 十6 - BA2.0mg/l＋NAA 0.2mg/L ；茎尖诱导和分化的最适培养基都为MS+ 6 一BA 1.0mg/L + NAA0.5mg/L。
大量文献指出，一定范围内茎尖越小，诱导的愈伤组织及不定芽数量越少，但脱毒质量越高。该试验利用鳞片和0.5mm以下的茎尖对东方百合进行离体培养，通过脱分化产生愈伤组织，或直接产生不定芽，建立了无性繁殖系。试验中，先用鳞片诱导分化一定量的无菌不定芽，然后再利用无菌不定芽剥取茎尖，比直接用带菌鳞茎剥取茎尖降低了污染率，提高了成活率且节省了材料，但脱毒效果需进一步研究。
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