微生物学实验室保存和增菌培养基

   
   一、菌种保存培养基 
 [配法] 
蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠3g，磷酸氢二钠2g，琼脂粉4.5g，蒸馏水1L 。 
将上述的成分混合于水中，加热溶解，调pH至7.4~7.6，分装试管2/3左右高度，121℃高压灭菌15min，成为半固体培养基，备用。 
 [质量控制] 
培养基呈淡黄色半固体状。大肠埃希菌(ATCC 25922)生长良好,动力阳性；福氏志贺菌(ATCC 12022)生长良好,动力阴性；金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)生长良好,动力阴性。 
二、增菌培养基 
1.葡萄糖肉汤 
 [用途] 
用于血液增菌。 
 [配法] 
蛋白胨(或月示 胨)10g，氯化钠5g，肉浸液（或心浸液）1L，葡萄糖3g，枸橼酸钠3g，5g/L对氨基苯甲酸水溶液10ml，1mol/L硫酸镁溶液20ml，青霉素酶1000 U。 
将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min，并补足失水，调整pH至7.8。 
过滤分装，每瓶50ml，高压灭菌115℃20min后，每瓶加入青霉素酶50 U，经无菌试验合格后，冷却备用。 
 [用法] 
将采取的血液标本，以无菌手续注入培养瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35℃培养箱内，每天1次取出观察结果。如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时作分离培养，可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中，至少应作两次分离培养。 
注: 
⑴ 枸橼酸钠为抗凝剂，可使血液加入培养基中不凝固。 
⑵ 对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。 
⑶ 硫酸镁主要抑制血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。 
⑷ 本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.3%～0.5%酵母浸膏以增加营养；加0.2%核酸刺激细菌生长；加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面，保护细菌免受抗体破坏；加入聚茴香脑磺酸钠（SPS）能中和补体的抗药作用从而提高检出率。 
2.血液增菌培养基 
 [用途] 
血液和骨髓液病原菌的增菌培养。 
 [配法] 
蛋白胨10g，氯化钠5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏粉3g，枸橼酸钠3g，磷酸氢二钾2g，5g/L对氨基苯甲酸溶液5ml，1mol/L硫酸镁溶液20ml， 4g/L酚红溶液6ml，青霉素酶50 U，聚茴香脑磺酸钠(SPS) 0.3g，蒸馏水1L。 
将上述成分（除酚红指示剂、青霉素酶外）混合加热溶解，校正pH至7.4，再加酚红，过滤分装每瓶30～50ml，经121℃灭菌15min和35℃24h无菌试验备用。临用时每瓶加入1.5～2.5 U青霉素酶。 
 [质量控制] 
伤寒沙门菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化脓性链球菌ATCC 19615、肺炎链球菌ATCC 6305、金黄色葡萄菌ATCC 25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853均生长良好。 
3.亚硒酸盐增菌培养基 
 [用途] 
沙门菌增菌培养。 
 [配法] 
蛋白胨5g，乳糖4g，磷酸氢二钠4.5g，磷酸二氢钠5.5g，亚硒酸氢钠4g，蒸馏水1L。 
先将亚硒酸盐加到200ml蒸馏水中，充分摇匀溶解。其它成分称量混合，加入蒸馏水800ml，加热溶解，待冷却后两液混合，充分摇匀，校正pH 7.0~7.1(通过调整磷酸盐缓冲对的比例来校正pH值)。最后分装于15×150mm的试管内，每管10ml。置水浴隔水煮沸10~15min，立即冷却，置4℃冰箱保存备用。 
 [用法] 
取新鲜标本1g或棉拭子采样直接种于该培养管内。摇动后置35℃培养过夜。如发现均匀混浊，管底有红色沉淀物，表示细菌生长。然后取培养物分离在选择性培养基上，如SS琼脂、麦康凯琼脂平板等，进行培养。 
 [质量控制] 
培养基应呈淡黄色或无色，透明无沉淀物。增菌灵敏度：伤寒沙门菌1×10-5，鼠伤寒及副伤寒沙门菌1×10-7。 
 [保存] 
4℃保存，1周内用完。 
注： 
⑴ 亚硒酸盐，包括亚硒酸钠、亚硒酸氢钠均可使用，但以亚硒酸氢钠效果为好。 
⑵ 磷酸盐缓冲对中，两者的用量比例与亚硒酸盐及蛋白胨的品种有关。制备前应进行调试，其总量为10g/L。 
⑶ 在制备过程中，亚硒酸盐不能直接加热。隔水煮沸时间亦不能超过规定时间，否则亚硒酸盐会变质，生成红色沉淀物。 
4.SS增菌液 
 [用途] 
用于沙门、志贺菌的增菌。 
 [配法] 
月示 胨 2g，蛋白胨8g，牛肉膏3.5g，酵母膏2g，葡萄糖2g，枸橼酸铁10g，硫代硫酸钠10g，亚硫酸钠0.7g，胆盐5.5g，磷酸氢二钠4g，磷酸二氢钾0.1g，去氧胆酸钠(进口) 1.5g，煌绿0.005g，蒸馏水1L。 
将上述成分加热溶于水中，调pH至7.1，分装试管（15×150mm），每管5~7ml，隔水煮沸5min备用。 
 [用法] 
取粪便标本1g直接种于增菌液内，35℃16~18h培养，取出转种于分离培养基即可。 
 [质量控制] 
培养基应呈淡黄色或略呈淡绿色。伤寒沙门菌ATCC 50096、福氏志贺菌ATCC 12022 生长良好；大肠埃希菌ATCC 25922 生长抑制。 
注： 
⑴ 切勿高压，隔水煮沸时间不超过5min。 
⑵ 煌绿用量应根据不同产品批号酌情增减。 
5.碱性蛋白胨水 
 [用途] 
霍乱弧菌增菌培养。 
 [配法] 
蛋白胨 20g，氯化钠5g，蒸馏水100ml。 
将上述成分溶解于水中,校正pH 至8.6，分装于试管8~10ml，经121℃灭菌15min备用。 
 [用法] 
将待检标本接种到碱性胨水中，置35℃培养6~8h，霍乱弧菌呈均匀混浊生长，表面有菌膜出现。取表面菌液一白金环移种到碱性琼脂、庆大琼脂或TCBS琼脂平板上。必要时做第二次增菌。 
 [质量控制] 
有条件的实验室可用标准菌株，一般临床实验室可用非01群弧菌，培养后生长良好者方可使用。霍乱弧菌E1-Tor生物型和副溶血弧菌生长良好（6h）；大肠埃希菌ATCC 25922不生长（6h）。 
 [保存] 
置4℃冰箱，2周内用完。 
注：若在每升碱性胨水中加入1%亚碲酸钾溶液0.5~1.0 ml，则成为亚碲酸钾碱性胨水，其增菌效果更为理想。

 

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