微生物学实验室中如何分离培养基

   
   一、革兰阳性杆菌分离培养基 
1.罗-琴改良培养基 
 [用途] 
用于结核分枝杆菌培养。 
 [配法] 
磷酸二氢钾2.4g，硫酸镁0.24g，枸橼酸镁(或枸橼酸钠) 0.6g，天门冬素3.6g，甘油12ml，蒸馏水600ml，马铃薯淀粉30g，新鲜鸡卵液1L，2%孔雀绿水溶液20ml。 
先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸镁、天门冬素及甘油，加热溶解于600ml蒸馏水中。再添放马铃薯粉，边放边搅，并继续置沸水中加热30min，待冷却至60℃左右时，加入鸡卵液1L及孔雀绿溶液20ml，充分混匀后，用无菌操作分装于灭菌试管，每支5~6ml，塞紧橡皮塞（最好是翻口塞），置于血清凝固器内制成斜面，经85℃1h间歇灭菌2次(或高压灭菌115℃20min)，待凝固后经无菌试验，4℃冷藏备用。 
 [用法] 
取晨咳痰或其它体液标本，经消化处理和离心沉淀的浓缩液0.1ml（约2滴）滴种于培养基的斜面上，尽量摇晃，置35℃5%~10%二氧化碳温箱内培养1~4周，观察结果。凡在1周内发现生长的菌落，一般不可能是结核分枝杆菌；在2周后生长的菌落，奶油状，略呈黄色，粗糙突起，不透明，即取菌进行涂片染色镜检及鉴定。 
 [质量控制] 
用结核分枝杆菌菌株作阳性培养试验。 
 [保存] 
置4℃冰箱内2~4周有效。 
注： 
⑴ 本培养基由Lowenstein-Jenden设计的基础上改良。 
（2）本培养基pH约为6.0左右，一般无须校正。 
（3）间歇灭菌的温度不宜超过90℃。 
2.血清斜面培养基(吕氏血清斜面) 
 [用途] 
用于白喉棒状杆菌培养。 
 [配法] 
1%葡萄糖肉汤(pH 7.6)100ml，无菌动物血清(牛、羊、猪、兔) 300ml。 
将上述成分混合后，分装于试管内，每管约4~5ml。斜插在血清凝固器内（或蒸笼）加热80~85℃30min，使血清凝固成斜面，冷却后放4℃冰箱内。取出后采用间歇灭菌法，85℃灭菌30min，连续3天，经无菌试验证明无杂菌生长即可应用。

 

上一篇：微生物学实验室保存和增菌培养基

下一篇：霍乱弧菌的微生物学诊断