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病毒的提纯



录入时间:2009-6-26 9:14:15 来源:青岛海博

所谓病毒提纯,就是应用各种物理、化学方法,以不使病毒受损伤和失活为前提,去除宿主细胞组分等非病毒杂质,提取出高纯度浓缩的病毒样品。病毒提纯是病毒学研究的重要前提,病毒微细形态结构的研究、病毒抗原蛋白的分离提纯、病毒化学成分及其遗传物质——DNA或RNA的详细研究都需要高纯度的病毒样品。病毒纯度只是一个相对的概念,很难有绝对的标准,通常以下几点可以作为判定依据。
1.物理均一性:测定病毒样品的物理均一性,是证明其纯度的常用方法,包括电镜检查、病毒粒子沉降系数和扩散常数及其在凝胶电泳、等电聚焦中的迁移率等。
2.病毒滴度与蛋白含量的比例:测定病毒材料的感染力或其血清学反应 滴度与其蛋白含量的比例,也是一种通常采用的纯度测定方法。病毒滴度对蛋白含量的比例越高,说明病毒的纯度越高。
3.免疫学反应:免疫反应单一而无非特异反应,则说明病毒材料比较纯净。
4.结晶形成:病毒粒子在十分纯净的情况下,经常可以形成结晶,但少数混有杂质的病毒样品亦可形成结晶,所以这也只是一个相对标准。  病毒提纯的主要依据和条件有:(1)病毒只在活的细胞内寄生、复制和增殖,要在病毒不失活的前提下,使之从细胞中释放出来,去除细胞成份。有些病毒如痘病毒、正粘病毒、副粘病毒、披膜病毒,病毒粒子被释放到细胞外,可以从培养液或尿囊液中提纯;而另一 些病毒如腺病毒、乳多空病毒、小DNA病毒,在毒粒成熟后只有少数病毒释放到细胞外,大量提纯时必须首先裂解细胞,使病毒大量释放。实验室常用冻融、研磨、高速捣碎、超声 波处理或高压冲击、中性去污剂裂解、蛋白酶解等物理和化学的方法。通过这些方法处理获得的粗制的病毒悬液,其中常含有大量的细胞碎片,一个有效的方法是以2 000~ 6 000r/m in离心30~40分钟,可除去90%以上的细胞碎片和杂质。
(2)病毒粒子实际上是大的蛋白颗粒,可以应用提纯蛋白质的一些技术方法。
 (3)对大小、形状和密度高度一致的病毒粒子, 可以采用分级分离的技术。当然不同的病毒,其生长特性及理化学性质不同,因此提纯方法也不尽一致。

 

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