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红细胞吸附法-病毒提纯方法



录入时间:2009-6-26 9:29:24 来源:青岛海博

 
所谓病毒的红细胞凝集反应,就是指病毒被红细胞表面粘蛋白吸附的现象。自Hirst发现流感病毒的红细胞凝集性质以来,随后相继发现其它一些动物病毒也有红细胞凝集性。Stanley证明,流感病毒在0℃时被红细胞吸附,而在37℃时却从红细胞上脱离下来的性质,从而将此方法应用于病毒提纯。  长春农牧大学应用醛化鸡红细胞吸附马流感病毒,取得较好效果。具体方法是:  采取鸡血,以无菌生理盐水洗涤3次后制成压积红细胞。另取福尔马林和生理盐水等量混合,制成福尔马林盐水。在2份福尔马林盐水中加入1份压积红细胞,充分振荡15分钟,置2~8℃冰箱内48h,每天振荡2~3次。届时取出,再振荡1次,后用700r/min离心5~10分钟,弃上清,再加20倍量生理盐水,振荡混合后置2~8℃冰箱过夜。弃上清,加入20]倍量生理盐水,如上洗涤3次。取沉淀红细胞,加入相当于初次压积红细胞量的生理盐水,]混匀后即可应用。  将马流感病毒感染的鸡胚尿囊液,作2]500r/min离心10分钟,吸取上清液。取保存于]2~8℃的病毒液100ml,加入2~8℃的醛化红细胞悬液6ml,充分振荡15分钟,立即放入冰箱内每2小时振荡1次,共2~3次,随后置冰箱中过夜,待其自然沉淀。次日吸出上清,如]其血凝价在1∶15以下,则证明已经充分吸附,此时即可进行释放,否则需再补加醛化红细]胞悬液继续吸附。  在已充分吸附病毒的醛化红细胞沉淀中,加入相当于原病毒液1/10量的5mol/L]NaCl10分钟。吸取上清液,即为浓缩病毒液,必要时可对已释放过病毒的醛化红细胞作第二次释放,方法同前。  上述吸附释放方法,可将病毒浓度提高10倍左右(以血凝效价表示)。

 

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