〖BT4〗1.实验动物根据欲分离病毒的种类，选择适当的实验动物和接种途径。动物病毒 学实践中，还常应用本动物进行实验感染试验，例如应用健康马驹作马传贫病毒的接种试验 ，应用健康猪、鸡分别作猪瘟、新城疫等的接种试验等等。本书第三篇“病毒学各论”中 将介绍各该病毒 的动物试验的详细方法。
〖BT4〗2.鸡胚目前常用鸡胚分离的病毒有正粘病 毒、副粘病毒、痘病毒、脑炎病毒及引起禽类疫病的其它许多病毒等。现列表说明几种主要 动物病毒的接种途径、敏感性和病变特征(表14-1)，并请参阅表8-1。〖HT5”H〗〖JZ 〗表14-1〓动物病毒的鸡胚接种途径和敏感性〖HT6SS〗〖BG(〗〖BHDFG4，WK11,K22，K9 ，K9W〗病毒种类〖〗〖ZB(〗〖BHDWG2，WK22〗 接〓种〓途〓径〖BHDG2，K4,K6,K4,K4,K4 〗卵黄囊〖〗绒毛尿囊膜〖〗尿囊腔〖 〗羊膜腔〖〗脑内〖ZB)〗〖〗病变特征〖〗备注〖BHDG2，WK11ZQ，K4,K6,K4。3，K9。2Z QW〗狂犬病病毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗鸡胚死亡〖〗〖BHDW〗乙型脑炎病毒〖〗 〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗鸡胚死亡〖〗〖BH〗马脑炎病毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖 〗〖〗鸡胚死亡〖BH〗流感病毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗鸡胚死亡〖〗出现血凝素 〖BH〗新城疫病毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗鸡胚死亡〖〗同上〖BHG2*2〗〖HJ*8〗淋 巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗轻度水肿〖HJ*2〗〖〗 〖BH〗痘〓病〓毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗痘〓〓〓斑〖〗〖BH〗蓝舌病病毒〖〗〖 〗〖〗〖〗〖〗〖〗白斑或鸡胚死亡〖〗静脉内更敏感〖BH〗传染性支气管炎病毒〖〗 〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗鸡胚卷缩死亡〖〗〖BH〗传染性法氏囊炎病毒〖〗〖〗〖〗 〖〗〖〗〖〗鸡胚死亡 〖〗〖BHG4*2〗鸡白血病病毒〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗〖〗肿瘤性痘斑 〖〗卵黄囊和静脉接种，出雏后两周内肿瘤发生率很高〖BHG2〗鹅细小病毒〖〗〖〗〖 〗〖〗 〖〗〖〗胚胎死亡〖〗〖BG)F〗〓〓注：〓、、表示递增的敏感性，以下说明不 易分离获得病毒。
〖HT5SS〗〖BT4〗3.组织培养细胞选择生长旺盛的敏感细胞备用。倾弃或吸去营养液并以Hanks液 或Earle氏液洗涤1～2次，加入不同稀释度的接种物(病毒液或待检病料悬液)， 每个稀释度 最少用2～3个细胞培养瓶。接入量以能使病毒液盖满细胞层为度。摇匀后置37℃温箱内感作 30～60分钟，使病毒充分吸附于细胞上。应用不同稀释度接种物的目的，是避免因病毒接 入量太大而引起自家干扰现象，同时也是为了减少接种物中的毒性物质造成细胞损伤。吸 附30～60分钟后加入新的维持液。维持液中不应含有相应的抗病毒抗体，因此不得加入对 该病毒 敏感的动物的血清，因其可能因感染或疫苗接种而在血清中含有特异性抗体。例如分离猪瘟 病毒和新城疫病毒时，不能应用猪和鸡的血清；分离口蹄疫病毒时不得应用牛、猪、 羊的血清等等。胎牛或未吮初乳的新生犊牛血清中通常不含特异性抗体，因为母体抗体不 能通过胎盘进入胎牛体内。但也必须指出，胎内病毒感染可能引起胎儿产生特异性抗体—— IgM。一般 而言，维持液中的血清含量应尽可能减少，甚至完全不用。如果接种物的毒性太大，例如 粪便悬液，则可使其吸附细胞30～60分钟后，将其吸出，再用洗液轻轻洗涤1次细胞，随 后加入维持液。这样，病毒已经充分吸附在细胞上，而接种物对细胞的毒性则因及时换入 维持液而降低。某些病毒，例如腺病毒和马传贫病毒等，可将接种物直接加至维持液中 ，不必预先吸附。细小病毒在宿主细胞进行有丝分裂时增殖，故在分离和培养这类病毒时 ，强调早期接种，即在细胞培养物尚未形成单层时就接种病毒，甚至进行同步培养。所谓同 步培养，就是将病毒接种于经胰酶分散的新鲜细胞悬液中，随后一起分装培养。于温度较 高的环境中，为保证病毒活力，特别是对抵抗力弱的病毒，操作过程中应将接种物(病 毒悬液)置于冰浴中。
上一篇：病毒的分离和鉴(滴)定
下一篇：病毒增殖的判定
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
