病毒在实验动物体、鸡胚和组织培养细胞内 增殖，显然都会影响机体和细胞的代谢和生命活动，并且经常通过一定的形态学和病理学变 化表现出来。关于病毒在实验动物体内和鸡胚内增殖所致的变化及其鉴定，将在本书第三 篇“病毒学各论”中论述。这里着重介绍病毒在组织培养细胞内引起的变化及其判定。
〖 BT4〗1.细胞病变(CPE)细胞病变现象是病毒在细胞内增殖及其对细胞产生损害的最明显的表现，包括胞 浆的颗粒性变和胞核的变形和碎裂等等，而且经常进而导致细胞的完全破坏。细胞病变经常具有病毒“种”的特性，可以作为病毒鉴定的依据之一。某些病毒引起整个细 胞的退行性变化或细胞某些结构成分的改变，导致严重的细胞破坏，例如猪的传染性胃肠炎 病毒和人的脊髓 灰质炎病毒；某些病毒引起细胞肿大、颗粒增多，病变细胞呈葡萄串状，例如腺病毒； 某些病毒感染导致胞浆内或胞核内特异性包涵体的形成，例如痘病毒、狂犬病病毒和疱疹病 毒；另一些病毒引起明显的细胞融合现象，产生合胞体(多核巨细胞)，例如犬瘟热病毒等； 也有一些病毒，当其于组织细胞内增殖时，并不引起明显的细胞变化，例如白血病病毒等。 必须强调指出，细胞病变是特定的病毒与细胞之间相互作用的结果。不仅同一种细胞在感 染不同的病毒时可能呈现完全不同的细胞病变，而且同一种病毒也可能在不同的细胞上引起 迥然不同的细胞病变。此外，营养液成分、培养温度以及病毒感染时细胞的“年龄”和代谢 强度等因素，也对细胞病变的产生及其严重程度呈现影响。但是，组织培养细胞内细胞病 变的出现，一般可认为是病毒增殖的确切证据。虽然接种物内的非特异性毒性物质也可能引 起细胞病变，但是这种非特异性细胞病变在继续传代时消失；而由病毒引起的细胞病变， 则因病毒对细胞培养物的适应，细胞病变在传代过程中不仅产生时间可能提早，而且病变的 严重程度也会增高。此外，加入相应的特异性抗体，能够抑制病毒引起的细胞病变， 而不影响非特异性细胞病变的出现。但也有些病毒，如兔出血症病毒，最初几代尚可引起细 胞病变，细胞逐渐适应病毒后则不出现病变。细胞病变通常在低倍(如60～100倍)显微镜下观察，一般要求每天检查1～2次，诸如细胞 的凝缩、团聚，细胞浆的颗粒变性以至 细胞的变性脱落等等，都可在不染色的情况下于低倍显微镜下看到。如欲检查包涵体或详 细观察细胞的变化，可将细胞培养物染色，再用光学显微镜观察。组织培养细胞的一个 最简便的染色方法，是先吸弃细胞培养物内的营养液或维持液，用pH68的磷酸盐缓冲盐 水配制的姬姆萨染色液(每毫升磷酸盐缓冲液内加入2滴姬姆萨原液)，室温染色一小时，用 自来水充分冲洗，干后即可观察。由于标本是在培养瓶的内壁，需要通过瓶壁才能看到，因 此只能应用低倍镜观察。为了克服这一缺点，便于在高倍镜乃至油浸镜下仔细观察细胞病变 或检查包涵体，可以采用飞片法。即在开始培养细胞时就在培养瓶中加入飞片，即切成窄条 的盖玻片。细胞培养和接毒的方法同上。待其开始出现细胞病变时取出飞片，在pH68的 磷酸盐缓冲盐水中充分漂洗，干后用甲醇或丙酮固定，并用姬姆萨液染色。这种飞片 可用加拿大香胶封固于载玻片上，进行高倍镜乃至油浸镜的检查。检查包涵体，常需应用 特殊的染色方法。近年来，在载玻片或聚苯乙烯塑料板上直接固定一个或多个小室，制成 带室载片(champer slide),如图14-1，观察细胞病变或检查包涵体更为方便。使用时，以 常规方法在小室内培养细胞和接种病毒，待细胞病变出现时，去掉小室，对载片固定、染 色和镜检，其优点是在一个载片可以进行多个病毒材料的接种。这一系统也可应用于酶染色 和免疫荧光等免疫组织化学方法检查。
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