泥胡菜的组织培养及高效无性系建立的研究一

摘要 [ 目的]研究泥胡菜快速繁殖技术并建立高效无性系。[ 方法] 以泥胡菜嫩茎为材料，研究愈伤组织诱导和分化、不定芽的分化和 生根、试管苗移栽和扦插及移植于山坡栽培所需要的条件。[ 结果]Ms+ 6.B A 0.3 mg ／ L+ 2， 4 一 D 1.0—1.5 m g ／ L是诱导嫩茎形成颗粒状愈伤组织的理想培养基 ； MS+A g N O₃  1.5 mg ／ L + 6 - B A  0.4mg ／L +N A A 0.1mg ／ L是颗粒状愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基； 1 ／ 2 M S+ I A A 0.6mg/L是试管苗生根和生根继代培养的理想培养基；炉灰渣是试管苗移栽和扦插的理想基质。[ 结论] 该研究为泥胡菜组织培养中适宜的培养基选择提供科学依据。 

关键词 泥胡菜；愈伤组织;无性系；快速繁殖  

泥胡菜( H e m i s t e p t a   l y r a t a   B u n g e ) 又称糯米菜、 石灰菜、 苦烂头菜、 野苦麻等， 为菊科泥胡菜属二年生草本植物， 生长于荒地、 路旁、 林下和海滨沙地等  。泥胡菜全草可药用， 具有清热解毒、 消肿祛瘀等功效， 能治痔漏、 痈肿疔疮、 外伤出血、 骨折、 白内障等疾病。嫩叶经沸水焯后可与豆腐、 葱等炒食， 也可凉拌食用。由于泥胡菜的药用和食用价值日益得到重视， 其经济价值逐年上升， 导致其野生资源不断减少。为了保护该野生资源， 笔者对泥胡菜进行了组织培养及无性系建立的研究。尽管 目前已经有多种菊科植物组织培养研究的报道,但迄今未见在泥胡菜上的报道。 

1 材料与方法

1 .1 材料 以采自大连石门山的泥胡菜作为试验材料。 

1.2 方法

1.2.1 无菌材料获得。将泥胡菜嫩茎和基生叶叶柄切成长4～ 5c m的茎段和柄段后， 分别放入5 0 0 ml 的磨 口广口瓶 中， 用清水冲洗约 1 5 m i n ， 再用0.0 5 ％的安利液振荡洗涤 3 次， 接着用无菌水洗涤 2次， 然后将材料移到超净工作台上。在无菌条件下用 7 0 ％ ～ 7 5 ％ 的乙醇灭菌 3 0 S 后 ， 用 0.0 5 ％ 的 H g C 1₂   溶液振荡灭菌3 m i n ， 再用0.0 3 ％的 H g C 1₂ 溶液振荡灭菌 1 3 mi n ， 最后用无菌水振荡洗涤5次即获得无菌材料。
1.2.2 培养条件。以 MS 、 1 ／ 2 MS为基本培养基 ， 附加不 同 种类、 不同浓度的细胞分裂素和生长素。固体培养基琼脂含量为4.5 g ／ L ， 诱导愈伤组织和愈伤组织分化培养基含蔗糖 3 0 g ／ L， 生根培养基含蔗糖 1 5 g ／ L ； 光照强度 2 O O 0 l x左右 ，光照时间 1 2   h ／ d ， p H   5.6—5.8 ， 培养温度( 2 5±1 )℃。 

1.2.3 不同浓度生长素对愈伤组织诱导的影响。把无菌嫩茎和叶柄切成长0.1～ 0.2cm的茎段和柄段后， 分别接种到含不同浓度 I B A、 2， 4 - D、 N A A的 MS+ 6 - B A 0.3 m g ／ L的培养基上 ， 进行愈伤组织诱 导培养。每种培养基接种 1 0 0个材料， 5 0 d后进行观察统计。 

1.2.4 不同培养基对愈伤组织分化的影响。将上述继代培养的颗粒状愈伤组织， 接种到以 MS+A g N O  1.5 mg ／ L和 1 ／ 2 MS+A g N O  1.5 m g ／ L为基本培养基， 附加不同浓度6 - B A和N A A的培养基上， 进行分化培养。每种培养基接种1 0 0个颗粒， 5次重复。材料分别放在光照和无光2种条件下进行培养。 

1.2.5 不同培养基对不定芽生根培养的影响。将上述分化继代培养的高0.6 c m以上、 生长旺盛的、 呈丛生状的不定芽从基部剪下 ， 接种到附加不 同浓度 I A A( 0.2 、 0.6 、 1.0 、 1.4 mg/L) 和2， 4 - D( 0.2 、 0.6、 1.0 、 1.4 mg ／ L ) 的1 ／ 2 MS培养基上进行生根培养。每处理接种 1 0 0个不定芽， 3次重复， 2 5 d后统计生根株数和每株生根数量， 计算生根率。 

将生根率和生根数量最多的试管苗剪成长 1.5cm、 具有1个顶芽和1— 2个侧芽的茎段， 接种到相同的培养基上进行生根继代培养。在培养条件不变的情况下， 统计每代培养所需时间并计算繁殖系数。连续培养7代， 观察生根试管苗的长势并计算繁殖系数。每次试验接种 1 0 0个外植体， 3次重复。
1.2.6 试管苗的移栽和扦插。①移栽。打开生根试管苗培养瓶的瓶塞， 置于4 0 0 0l x左右的光照下炼苗3 d后， 用镊子将试管苗从培养瓶中取出， 剪下上半段， 洗净根部的培养基后， 将具有根的试管苗移栽到表层为5～ 7cm厚的炉灰渣、下层为肥沃园土的温室苗床或花盆中。然后弥雾浇透水， 保持湿度9 0 ％以上、 温度 2 5℃左右、 防止直射光照， 3 0 d后进行观察统计。共移栽4次， 每次移栽8 0 0株。②扦插。将移栽试管苗剪下的上半段从培养瓶中取出， 剪去最下面一个叶片后， 将下部切口放到1 0 0 m g ／ L的I A A溶液中处理4 m i n 左 右， 扦插到浇透水并打上深约 1cm小孔的与移栽相同的温室苗床的炉灰渣( 下面为园土) 中， 随即弥雾喷浇淤闭插孔，再按照与移栽试管苗相 同的条件进行 管理 ， 3 0 d后 观察统计。共扦插3次， 每次扦插8 0 0株。 

1.2.7 试管苗的移植。将在温室中移栽和扦插成活的泥胡菜试管苗移植到试验材料采集地山坡上， 按照野生的条件进行栽培， 并定期观察统计。 

2 结果与分析

 

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