泥胡菜的组织培养及高效无性系建立的研究二

2 结果与分析

2.1 不同浓度生长素对愈伤组织诱导的影响 
接种后 1 5 d ， 在培养嫩茎段的培养基上， 有的开始形成黄色的愈伤组织。接种5 0 d后观察统计， 由表 1可见， 在附加不同浓度I B A的培养基上， 不能诱导叶柄和嫩茎形成愈伤组织； 而在附加不同浓度2 ， 4.D和N A A的培养基上， 均能诱导， 但愈伤组织诱导率和长势存在一定的差异。从愈伤组织的诱导率和长势看， 附加不同浓度2 ， 4 一 D的培养基好于附加不同浓度N A A的培养基。尤其是在附加浓度为 1.0 m g ／ L和 1.5 m L 的2 ， 4 - D的培养基上， 不仅诱导率达 1 0 0 ％， 而且所诱导的愈伤组织为绿色的颗粒状。一般认为， 这样的愈伤组织具有分化能力。将在附加浓度为 1.0 mg ／ L和 1.5 mg ／ L的2 ， 4-D的培养基上诱导的愈伤组织接种在相同的培养基上， 进行继代培养。经过 3次重复试验， 每次继代培养6代的观察都表明， 继代培养的周期缩短为 4 0 d ， 每个培养周期平均每个愈伤组织颗粒能分化出2 8.6个新颗粒， 且长势基本保持不变。这说明 MS+ 6 - B A 0.3 m g ／L+2 ， 4 一 D  1.0～1.5 m g ／ L是诱导泥胡菜嫩茎形成颗粒状愈伤组织的理想培养基。
2.2 不同培养基对颗粒状愈伤组织分化的影响 接种后 1 5 d左右， 部分培养基可见愈伤组织颗粒开始分化。5 0 d后观察统计， 由表2可见， 在无光条件下培养的不能分化， 而在光照条件下培养的均能分化， 但以MS为基本培养基的分化率高于 1 ／ 2 MS 。尤其是在 MS+A g N 0₂   1.5 mg/L+6 - B A 0.4 m g ／ L+N A A 0.1 m g ／ L的培养基上， 不仅分化率达 1 0 0 ％， 而且分化的不定芽长势好。观察统计表明， 在该培养基上培养的颗粒状愈伤组织培养到3 0 d时， 分化率已达7 9 ％， 并且在已分化的不定芽基部又会分化出多个不定芽； 继续培养到5 0 d时， 平均每个愈伤组织颗粒能分化出2.1 个高0.5 c m以上、 长势旺盛的不定芽。把分化培养的不定芽从基部剪下，接种到相同的培养基上进行分化继代培养。经过 3次重复试验， 每次继代培养5次表明： 继代培养的周期缩短为4 0 d 。 1 次继代培养 1个不定芽可分化形成4.8个高0.6 c m以上、生长旺盛的、 呈丛生状的不定芽。上述试验结果表明： M S+ A g N O₃ 1.5 mg ／ L+6.B A0.4 mg ／ L+N A A0.1   m g ／ L是泥胡菜颗粒状愈伤组织和不定芽分化的理想培养基。
2.3 不同培养基对不定芽生根的影响 培养 1 0 d左右时观察发现， 在含有不同浓度 2 ，4 -D的培养基上， 部分插入培养基的不定芽周围能够生长出愈伤组织， 但不能诱导形成根原基 ； 而在含有不同浓度 I AA培养基上能够形成可见根原基。 

培养到2 5 d时， 接种在附加2 ， 4 -D的培养基上的材料不能诱导生根 ， 而在所有附加 I A A的培养基上均可生根。尤其是附加 I A A   0.6   m g ／ L的培养基上， 不仅生根率高达 1 0 0 ％， 生根数量达到7.2条／ 株( 见表3 ) ， 而且试管苗高5 c m左右， 长势旺盛。将该培养基上培养的试管苗在培养条件不变的情况下， 进行生根继代培养， 2 3 d可培养 1代生长非常旺盛的试管苗， 每一代的繁殖系数为 3.2； 连续培养7代， 试管苗的长势和繁殖系数保持不变。上述表明， 1 ／ 2  MS+I A A 0.6 mg ／ L 是泥胡菜试管苗生根和生根继代培养的理想培养基。 

2.4 试管苗的移栽和扦插 观察表明， 移栽后 1 4 d可见成活并开始生长； 3 0 d时生长旺盛， 平均成活率为9 5.5 ％； 5 0 d 后开始旺盛生长。扦插 1 7   d时可见成活并开始生长， 平均成活率为9 1.2 ％ ； 6 0 d 左右开始旺盛生长。扦插苗初期比移栽植株小 1 ／ 3左右， 7 0 d时外观上就基本一致。上述说 明炉灰渣是泥胡菜试管苗移栽和扦插的理想基质。 

2.5 移植试管苗的长势 移植后的定期观察表明， 移植成活率几近1 0 0 ％。与野生苗相比， 移栽和扦插的泥胡菜试管苗长势粗壮 、 旺盛。翌年 4月中旬开始发芽生长， 发芽时间较野生苗早7 d左右。6、7月份开花， 8、9月结实。另外， 对移植试管苗根系的观察还表明： 根系相当发达， 相当于野生植株的 2倍左右。经过连续 3年的观察发现， 移植山坡上的泥胡菜试管苗各种性状均与野生植株一致， 并具有长势旺盛 、春天发芽早 、根系发达的性状。 

3 结论与讨论

该研究以泥胡菜嫩茎为材料，成功建立起泥胡菜高效无性系。研究结果表明， MS+ 6 - B A  0.3 m g ／ L+ 2 ， 4 一 D 1.0～1.5 mg ／ L是诱导泥胡菜嫩茎形成颗粒状愈伤组织的理想培养基 ； MS十Ag NO₃ 1.5 mg ／ L+6一 B A  0 .4   mg ／ L+NAA 0 .1 mg ／ L是颗粒状愈伤组织和不定芽分化培养的理想培养基； 1 ／ 2  MS + I A A  0.6 m g ／ L是试管苗生根和生根继代培养的理想培养基； 炉灰渣是试管苗移栽和扦插的理想基质。移植的试管苗在其他各种性状保持不变的情况下， 出现了长势旺盛、 春天发芽早、 根系发达的性状特点。 

研究还发现， 用继代培养的方法进行快速繁殖， 1 个愈伤组织颗粒4 0 d能形成2 8.6个新颗粒， 1年能繁殖出2 8.6 个后代； 1个不定芽4 0 d可分化形成4.8个生长旺盛的不定芽， 1 年能繁殖出4 . 8个后代； 生根试管苗2 3 d可繁殖培养 1代， 每 1 代的繁殖系数为 3.2 ， 1年能繁殖出3.2  个后代。可见不论采用哪种方法进行快速繁殖， 每年都能产生大量的试管苗， 达到建立高效无性系的目的。但是， 从长势和有效性两个方面看， 生根继代的方法虽然繁殖速度较慢， 但所培养的试管苗不仅生长旺盛， 而且几乎没有无效苗。所以， 在进行规模繁殖中， 应采用生根继代的方法。 

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