明月山红花油茶嫩枝组织培养研究二

1.2.2愈伤组织的诱导
试验采用正交设计。将初代培养的材料剪切后转入继代培养基中，以MS为基本培养基，对①2，4一D(0，0.1，0.2，0.5)、②NAA(0.05，0.1，0.2，0.③BA(0.5。1.0，1.5，2.0)，进行L16(45)正交试验。将剪切好的材料接种在培养基上，观察其分化产生愈伤组织的情况，统计分化率(产生愈伤的外植体占无菌外植体总数的百分率)。

2结果与分析
2.1不同外植体的离体培养选取易于分化的明月山红花油茶茎尖作为外植体，经过预试验和参照前人研究结果，选定MS+0.3NAA+1.OBA作为进行外植体选择的基本培养基。

由表1可以看出，培养10d的新萌发嫩枝各部位的愈伤组织的分化率均较20d和30d嫩枝高，并且随着苗龄的增加材料的死亡率上升；茎尖的分化率明显高于下胚轴和胚根，其中茎尖分化的愈伤组织的比例较叶片要高。在MS+0.3NAA+1.0BA培养基上，苗龄10d的嫩枝茎尖有较高的愈伤组织分化率，是较适宜的诱导愈伤材料。
2.2愈伤组织的诱导外源激素可以诱导成熟的植物器官脱分化产生愈伤组织。以MS培养基为基本培养基，添加生长素2，4一D、NAA和细胞分裂素BA，进行明月山红花油茶愈伤组织的诱导。以分化率为试验指标，对诱导愈伤的L16(45)正交试验进行极差分析，结果见表2，在愈伤组织诱导中2，4一D是主要影响因素，其次为NAA和BA。当NAA0.5mg／L、BA2.0mg／l。时，愈伤组织的分化率达到84.9％，与其他组合相比较可用来诱导的不定芽的有效愈伤组织比率达到最高。
试验中还发现，随着2，4-D浓度的升高，愈伤组织的分化率有所上升，当把子叶接到A16(MS+2,4-DO.5+NAA0.5+BA0.5+3％蔗糖培养基时，材料在20d内伞部愈伤化，且整块愈伤度膨大。结构疏松。

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