细叶石斛原球茎组培褐化抑制与试管苗生根一

录入时间:2009-6-30 11:26:04 来源：青岛海博

摘要：研究细叶石斛原球茎的褐化抑制和试管苗的生根，实验结果表明活性炭对抑制原球茎的褐化效果比较好，WPM 和大量元素减半的MS 培养基比较适合细叶石斛的生根，生长调节物质IBA 、NAA 对细叶石料生根的影响达到显著水平。
关键词：细叶石料；原球茎；褐化；生根
细叶石斛（Dendrobium hancockii Rolfe ）又名黄草，加工成枫斗后叫“节节草”枫斗。常附生于湿度大并有充足散射光的密林树干，并常与苔葬植物伴生，或生长于林中的山岩石缝或石槽间，岩石质地以粗糙、松泡、易吸潮、表面附着腐殖质土和植物苔藓者为佳。细叶石斛为阴性湿生植物中耐寒冷和稍耐干旱的品种。
目前对细叶石斛的研究不多，华允芬等对3 种药用石斛：细叶石斛、细茎石斛和铁皮石斛的多糖成分比较，发现这3 种石斛都含有较高的总多糖。陈云龙等对细叶石斛茎上部、茎中部、茎下部和根中的多糖、生物碱和矿物质含量进行了分析，并研究了其水溶性提取物对SD 大鼠胸主动脉的舒张效应。陈云龙等研究表明细叶石斛中总多糖含量较高，并含有较多的钾、钙、镁、铁、锰、锯、钦和铜等元素，生物碱含量在不同的部位存在差异，其中茎的上部最高，茎的中部和下部以及根部含量差异不大。细叶石斛水溶性提取物强烈拮抗苯肾上腺素所致的大鼠胸主动脉血管收缩作用，对内皮完整和无内皮功能的2 种样本均引起类似的浓度依赖性舒张效应。石斛是我国著名的传统药材及出口商品，主要来源于野生资源。由于受到环境因素制约和人们的过度采伐，野生资源逐年减少，而其用药需求量却日益增大，因此，加强石斛的资源保护及扩大种植面积具有重要意义。而利用植物组织培养进行栽培，不但可以提高成活率，还可以缩短栽培的时间。目前有关石斛组织培养的文献有很多，特别是金钗石斛、铁皮石斛等。但是有关细叶石斛的组织培养未见报道，笔者曾对其原球茎及丛生芽的增殖做过研究，发现在对细叶石斛的原球茎的增殖过程中经常有褐化现象出现，因此本文在此基础上着重研究了细叶石斛原球茎的褐化抑制及无菌苗的生根。
1 材料与方法
1.1 不同的培养条件对原球茎褐化抑制影响的实验设计
在筛选出较适宜原球茎增殖的培养基配方1 / 2 MS + 6 一BA 1.Omg/L + IBA 0.3 mg / L ＋蔗糖30 g / L ＋琼脂7.2g/L 的基础上，采用不同的培养条件进行培养：① 添加活性炭粉浓度是1g/L ；② 添加聚乙烯毗咯烷酮（PVP ) 1g/L ；③ 添加维生素C 浓度是1g/L ；④ 培养基的pH 值调节到5.3 ；⑤ 对照组。每个编号接10 瓶。选取发育相同生长良好的原球茎进行接种，每瓶接3 小块原球茎，每块约0.5 cm 大小。接完种后直接放到光照培养室中培养，光照强度为1 500 - 2 ooolx ，光照时间为12 h/d ，培养室温度为25 土2 ℃ 。
1.2 筛选适宜的生根基本培养基的实验设计以MS 、大量元素减半的MS 培养基、B5 、WPM 、N6 为基本培养基，分别附加IBAO.5mg/L 、NAA2.0 mg/L 、6 一BA1.0mg/L 、蔗糖30 g/L 、琼脂7.2 g / L ，挑选在丛生芽增殖中长势良好、比较均匀的无菌苗作生根培养，每一种培养基接10 瓶，每1 瓶接种3 一5 株丛生芽，接种后光照培养条件与上同。以开始生根时间的先后为统计结果。
1.3 生长调节剂的筛选试验设计
试验采用正交实验设计，选取3 因素2 水平的L4（2 )³正交表。在大量元素减半的Ms 培养基附加影响细叶石斛生根的3 种试验因素：IBA 、NAA 、6 一BA 等生长调节剂，分别编号为A 、B 、C ，每一因素各取2 个水平。用L4 ( 2 )³正交表安排试验，即按设计的试验方案配制培养基：大量元素减半的MS 培养基＋ABC ＋蔗糖30 g/L ＋琼脂7.2 g/L , pH 值调至5.5 （④ 号培养基除外），每个试验号5 瓶（5 个重复），每一瓶接种3 一5 株丛生芽。接种后光照培养条件与上同。

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