雷公藤以芽繁芽组织培养研究一
录入时间:2009-6-30 15:15:45
来源：青岛海博
摘要：以雷公藤茎段为材料，用正交试验设计来寻找其组织培养的最佳配方，结果表明：芽段在MS 十NAA 0.01mg/L 培养基中，可萌动产生新叶和新芽；在增殖培养中，以1 / 2 MS 十6 一BA lmg/L + NAA 0.2mg/L 组合月增殖系数最大，达5.38 ，且芽生长最好；在生根培养中，以1 / 2 MS + ABT 一1 # 0.6mg/L + I BA 0.3mg/L 的生根率最高，达80.8 ％。
关键词：雷公藤；以芽繁芽；组织培养；正交试验
雷公藤，又名黄藤根、断肠草、菜虫药、南蛇根、三棱花，旱禾花等，属卫矛科（Celastraceae ）雷公藤属攀缘藤本植物。雷公藤的根、叶、花、果均可人药，是治疗类风湿病、肾炎、外科皮肤病及癌症等多种疾病的重要野生传统地道中药材。《本草纲目》 一书中载有此药。雷公藤四季开花，夏秋两季芳香浓郁，春冬两季微有香气。四季栽培，可美化环境。近年来，随着市场对雷公藤原料需求的日益增长和野生资源的日益枯竭，雷公藤的资源培育和合理利用引起了有关部门和企业的重视，开展其快繁技术体系的研究势在必行。据斯金平等报道，浙江省得恩德制药有限公司2002 年在浙江新昌、丽水进行雷公藤GAP 基地建设试验，美国国立肿瘤研究所等国外科研单位也在福建泰宁建立了雷公藤基地。赖呈纯等以带腋芽的幼嫩茎段为外植体，研究雷公藤的离体快繁技术。结果表明：附加2.omg/L BA 和0.lmg/L IBA 的MS 固体培养基可诱导腋芽萌发，诱导率达95 % ; 附加3.omg/L BA 和0.lmg/L IBA 的Ms 固体培养基为适宜的芽苗继代增殖培养基，增殖率可达5.21 ，但未涉及到生根培养。本研究针对福建省三明地区经过优良选育的雷公藤无性系进行以芽繁芽组织培养试验，期望为建立成熟的生产技术体系和实现雷公藤工厂化生产奠定基础。1 材料与方法
采用三明地区经过选优的300 株雷公藤扦插苗，以芽为诱导材料。采回的枝条自茎尖开始按1.2 一1.5 cm 剪取芽条，外植体消毒过程为：洗衣粉＋灭菌净溶液一0.1％多菌灵溶液、流水冲洗1.5h 一0.4 ％的灭菌净溶液升70 ％乙醇一0.1 ％升汞溶液一无菌的0.1 % CaCl2溶液。
接种时，芽以形态学下端插入培养基中并注意防止芽原基接触培养基。每瓶接1 个芽段，按标记分开放在培养室培养，2 一3d 观察1 次，挑出污染的组培瓶以减少污染源，记录结果。
1.1 启动培养试验
经过预试验，初步认为在启动培养时，芽主要是靠自身的营养来支持其萌动，培养基的成分对芽的萌动培养并无明显的影响，主要影响因子是外源激素。因此，本研究在启动培养中对细胞生长素3 个水平和细胞分裂素2 个水平进行试验，设计见表l 。每瓶1 个芽，每处理50 瓶，3 次重复。1 个月后，调查芽萌动的情况。
1.2 增殖培养试验
采用L9（34 ）正交试验设计，对培养基、细胞生长素和细胞分裂素3 个水平进行试验，设计见表2 , 每瓶6 个芽，每处理10 瓶，3 次重复。
1.3 壮苗培养试验
增殖培养的芽苗，大多数矮小纤细。为了提高生根率，需经过壮苗培养，壮苗培养也保证组培苗在炼苗移植过程中有较高的成活率。壮苗的培养基与激素配比为：l / 2 MS + NAAO.lmg/L 。
1.4 生根培养试验
通过采用正交试验设计研究雷公藤再生植株生根时的最佳培养基与最佳激素浓度配比，其因素与水平采用L9(34)设计，见表3 。
培养基pH 值为5.8 ，蔗糖35 酬L ，卡拉胶5.5 g 。灭菌。每个试验号接种10瓶，每瓶接种6 株，重复3 次。
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