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水生呼肠孤病毒属



录入时间:2009-7-3 10:39:01 来源:青岛海博

水生呼肠孤病毒属(Aquareovirus)[HT5K] 同义名:水生动物呼肠孤病毒(Aquatic animal reovirus) 1979年Meyers从美国牡蛎中分离出呼肠孤病毒(13p2),1981年Winto 等从大马哈鱼分离出呼肠孤病毒(CSV),1983年 Nagabayashi等从日本牡 蛎中分离出JOV1病毒,1987年 Winton等再次从3种鱼类(Notemigonus Crysoleueas ,Oncorhynchus keta 和Ictalurus punctatus )以及美国牡蛎 中分离出4种呼肠孤病毒。我国学者(1983)从草鱼出血病中分离出一株 草鱼出血病病毒,并鉴定为呼肠孤病毒科中的新成员。这些从鱼类及贝类发现的 呼肠孤病毒,它们有一些共性,即病毒外观相似于正呼肠孤病毒,粒子直径75nm 左右,核心约50nm。在氯化铯中浮密度136g/cm3,能抵抗乙醚和 蛋白酶处理而感染性不受影响。双股RNA基因组有11个节段,分子量为03×103~25×103kDa,总分子量15×103kDa。分3类,即3个L,3个M,5个S。有5种主要结构蛋白,分子量34×103~135×103Da。至少还有2种次要的病毒蛋白存在。病毒在胞浆内复制,可能类似于正呼肠孤 病毒复制方式。病毒宿主范围包括变温脊椎动物和无脊椎动物(贝壳类) 。能在鱼类细胞系中有效增殖,在某些鱼类细胞上能形成蚀斑或合胞体。病毒呈水平传播, 尚未发现任何生物传播媒介。鉴于上述特点,它们不同于已知呼肠孤病毒科中任何一属,曾建议提名为水生 动物呼肠孤病毒属(Aquatic animal reovirus),现正式归为一属。该属代表 种金体美鳊鱼病毒(Golden shiner virus )。此外,还包括13p2呼肠 孤病毒、大马哈鱼呼肠孤病毒(Chum salmon virus )、鲇鱼呼肠孤病 毒(Channel catfish reovirus )。还可能包括有鲤属鱼呼肠孤病毒(Tench reovirus)、圆鳍雅罗鱼呼肠孤病毒( Chub reovirus )、银大马哈鱼呼肠孤病毒(Coho salmon reovirus)、文蛤呼肠孤病毒( Hard clam reovirus )、草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus )即草鱼出血病病毒、大菱鱼呼肠孤病毒(Turbot reovirus)。属中除草鱼呼肠孤病毒(草鱼出血病病毒)外,其它均无重要的致病意义。[BT(3+1]草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus) [HT5K] 同义名:草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus),鱼呼肠孤病毒。 [HT]草鱼出血病主要危害10cm 左右的当年草鱼(4~5月龄),死亡率可达70% ,二龄草鱼也易感,成年草鱼则为无症状感染。感染鱼游泳异常,继而离群 独处,或漂游水面,或沉卧池底,或剧转打圈,多在出现上述症状后一天内死 亡。病死鱼体色深暗,眼球突出,全身出血、充血。临床表现通常可分三型:即以肌肉充血 为主的“红肌肉型”;以鳍基及鳃瓣充血为主的“红鳍红鳃型”;以肠道严重 出血为主要特征的“肠炎型”。以上三型往往混合出现。本病是我国最主要的鱼病之一,遍及我国南方各省,当水温超过20℃时广为流行,一般多在5~9月,8~9月为高 峰,造成严重的经济损失。最早于1970年在湖北发现,起先怀疑其病原为 气单胞菌,后来证实为病毒,曾有疱疹病毒之说,1983年确定为呼肠孤病 毒,现定名为草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhage virus,GCHV)。我国 科技工作者经过十余年的不懈努力,在病原、诊断和免疫预防方面做了大量 的工作,令人瞩目。1988年以来,从江浙等地以出血症为特征的草鱼中还分离到另一种不同于呼肠 孤病毒的类似小RNA病毒的病毒。
 
[BT4]1. 形态和理化学特性草鱼出血病病毒直径65~70nm,双层衣壳,外衣壳厚约9nm,内衣壳52nm。超 薄切片可见病毒粒子在胞浆中呈晶格状排状。基因组为双股RNA,分11个节 段,总分子量约15×103kDa;聚丙烯酰胺凝胶电泳图型为3∶3∶3∶2,可因 毒株不同有所差异,分子量在03×103~31×103kDa。有5种主要结构多肽,分子 量32×103~137×103Da。蔗糖浮密度130g/cm3,氯化铯浮密度137g/cm3 。病毒对酸(pH3)、碱(pH10)及热(56℃,30min)均稳定,对氯仿和乙醚 不敏感。组织中的病毒在-20℃保存两年仍有活力。未发现有血凝活性。
 
[BT4]2. 抗原性草鱼出血病病毒与其它已知国外分离的鱼类呼肠孤病毒,如大马哈鱼呼肠孤病毒 、金体美鳊鱼病毒等无抗原性交叉。至于毒株间是否存在着抗原性差异尚待研 究,用特定毒株制备的疫苗对不同地区的免疫效果可有差异,提示可能存在着 不同的血清型。毒株血清型与电泳型之间的关系及其在流行病学上的意义同样有 待阐明。
 
[BT4]3. 病原性草鱼出血病病毒除感染草鱼外,尚能人工感染青鱼及穗鱼,从自然发病的青鱼 中分离到的病毒与本病毒有很强的交叉反应。鲢、鳙、鲤可成为病毒的携带者 ,成熟的草鱼卵也可带毒。人工感染在水温25~28℃时,潜伏期7~10天。浸泡感染也有很高的发病 率,表明鳃可能是病毒的入侵门户。被污染的水可传播本病毒。
 [BT4]4. 培养草鱼出血病病毒能在草鱼细胞系中增殖,最适温度25~28℃,常用的有草鱼 吻端组织细胞系ZC7901、草鱼肾细胞株CIK及草鱼胚胎细胞系C P80等。在ZC7901细胞上可产生细胞病变,特点为细胞圆缩、脱 落,在此细胞上传至22代,产生细胞病变的时间缩短,为3~6天,而对草 鱼的致病性不变。CIK细胞的适应毒株28℃ 24小时可产生蚀斑,直径小于 1mm,培养48~72小时后空斑增大至2mm。有的毒株不产生明显的细胞 病变,只能凭借荧光抗体或其它手段检测。在非鲤科鱼类细胞未见有增殖的报 道。
[BT4]5. 免疫除用有机碘等消毒剂处理带毒鱼卵及被污染鱼塘等措施外,还可采用免疫接 种法控制本病。 生产实践中应用多年的组织灭活疫苗行之有效。近年来已研制了细胞培养灭活疫苗,并采用 大转瓶培养及微载体培养新工艺。在免疫途径方面采用尼龙袋充氧浸泡免疫, 均是值得注意的可喜进展。采用标准化的方法筛选毒株并工厂化生产疫苗是 今后的研究方向。
[BT4]6. 诊断根据流行病学及症状可作出初步诊断,但确诊有赖于病原分离与鉴定。
(1)病原分离 采取病鱼血、肝、肾等组织作分离材料。病料应尽可能新鲜 ,否则影响检测结果。分离病毒可试用ZC7901、CI K等草鱼细胞系,置28℃培养,观察至少一周,如无细胞病变、蚀斑产生 ,应继续盲传。必要时可用荧光抗体或电镜技术检测。由于分离病毒花费时间长, 再加上分离病毒较不易成功,因此不适于作常规诊断手段。
(2)免疫学检测 使用较广泛。目前已报道的检测病毒方法有荧光抗体检 测、ELISA试验及葡 萄球菌A蛋白协同凝集试验。荧光抗体法可用于检测细胞培养或病鱼组织 冰冻切片中的病毒,双抗体夹心ELISA的应用更为广泛,可检测病鱼组织 悬液或细胞培养冻融液的上清液里的病毒。葡萄球菌A蛋白协同凝集试验是用兔抗 草鱼出血病病毒高免血清致敏的A蛋白,再滴加待检材料,混匀,置室温下3 分钟后即可观察,出现凝集者为阳性。据介绍病肝的检出率最高。此外还可采用PAGE、电镜等手段诊断草鱼出血病病毒。抗体检测目前在我国尚未普遍开展。

 

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