萍蓬草的组织培养及快速繁殖的研究一

录入时间:2009-7-6 17:19:29 来源：青岛海博

【摘要】以萍蓬草的嫩根茎为外植体，在附加不同浓度的BA 、IAA、NAA 和2 , 4 一D 的Ms 、1/2 Ms 或1 / 3 Ms 培养基上进行了愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、不定芽的生根、试管苗的移栽和移植研究，成功的建立起萍蓬草嫩根茎无性系，达到了快速繁殖的目的。结果表明：MS 十BA0.4~0.8 mg/L+ 2 , 4 一D 1.2 mg/L是诱导嫩根茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基；1/2 Ms + AgNO₃1.2 mg/L十BAO.3 mg/L十NAAO.l mg/L，是诱导颖拉状愈伤组织和不定芽分化的理想培养基；1/3Ms + IAA0.5 mg/L的液体培养基是试管苗生根培养和生根继代培养的理想培养基；试管苗移栽平均成活率为99.4 ％。
关键词：萍蓬草，愈伤组织，无性系
萍蓬草又称水粟、水粟包、萍蓬莲、黄金莲，属于睡莲科睡莲属多年生水生草本植物。萍蓬草种子富含淀粉，可食用，如粟，果实可煮粥，古时用于代粮。萍蓬草根状茎含萍蓬草碱、谷街醇、棕搁酸、没食子酸、烟酸等化学成分，具有补虚、止血、健胃、调经等功效，能治消化不良、月经失调、体虚衰弱和刀伤等疾病气近年来辽宁南部地区的人们对其进行观赏栽培。但由于在北方生长的萍蓬草不易形成种子，即使形成的少量成熟种子也难以收集，因此，人工栽培只能利用数量有限、长6 一8cm 、具有芽的根茎进行无性繁殖。然而，由于萍蓬草的根状茎具有重要药用价值，多年来人们一直在进行大量的采集，这使本来在北方分布就很少的萍蓬草几近绝迹。由此使人们难以得到进行栽培的种苗，限制了观赏栽培生产的发展。于是，我们对萍蓬草进行了组织培养的研究，以期满足人们观赏栽培对种苗的需求，并为转基因等相关研究奠定技术基础。
1.材料与方法
1.1 材料及灭菌
于5 一月份将在池塘浅水区生长非常旺盛的萍蓬草挖出来，将全株用自来水反复洗涤干净，将其根部置于0.001 ％的HgCl2 溶液中初步杀菌48h 后，把嫩根茎剪下，置于500ml 的磨口广口瓶中，用自来水冲洗4Omin 左右，再用0.05 ％安利洗涤液振荡洗涤15min ，移至超净工作台上进行操作。将经上述处理的嫩根茎用无菌水洗涤至没有泡沫时加人70%乙醇灭菌约20s 左右，迅速用无菌水振荡洗涤2 次，再用0.05 % HgCl2溶液振荡灭菌5min 后将灭菌液倒掉，再倒人0.025 % HgCl2溶液，继续振荡灭菌15min ，最后用无菌水洗涤5 次。在无菌条件下，将经过上述灭菌处理的嫩根茎切成0.2-0.3cm 的根茎块，接种到相应的固体培养基上，进行培养和观察。
1.2 培养条件
以1/2MS 和1/3MS 为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素和生长素。以1/2MS 为基本培养基时，加蔗糖15g/L；以1/3MS 为基本培养基时，加蔗糖10g/L 。固体培养基胨力强度为160g/L，pH5.8 - 6.0 , 培养温度18 一26 ℃ ，光照12 脚左右，光照度2000~3000lx。
2 ．结果与分析
2.1 不同浓度激亲对愈伤组织诱导的影响
在超净工作台上，将萍蓬草无菌嫩根茎块接种到装有以MS 为基本培养基附加不同浓度的BA 、2 , 4 一D 、IAA 的培养基三角瓶中，进行愈伤组织的诱导培养，每种培养基接种100 块，每个三角瓶中接种10 块。接种培养以记后进行观察和统计。由表1 可见，在不用激素2 , 4- D 的培养基上不能诱导嫩嫩茎形成愈伤组织；在不同浓度的BA 与浓度为l.2mg/ L , （单位下向略）的2 , 4 一D 配合使用时，会不同程度的诱导嫩根茎形成愈伤组织，但不同浓度的BA 愈伤组织的诱导率、愈伤组织生长速度及外部形态差异较大。其中浓度为0.4 和0.8 的BA 与浓度1.2 的2，4 一D 配合使用时，不仅愈伤组织的诱导率达到了97 ％以上，而且愈伤组织的生长速度快，且质地较为疏松、外观呈淡绿色的颗粒状。这种愈伤组织为具有分化能力的愈伤组织闷。将上述诱导培养的愈伤组织接种到相同的培养基上，在培养条件不变的情况下进行继代培养。统计每代培养所需时间。连续培养8 代表明，在此培养基上诱导形成的愈伤组织在同一培养基上连续继代培养生长的愈伤组织，不仅仍具有分化和形成愈伤组织的能力，而且愈伤组织培养周期缩短为45 d ，每个继代周期繁殖系数为36 。这说明，Ms + BAO.4~0.8 + 2 , 4 -D 1.2 是诱导萍蓬草嫩根茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基。

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