萍蓬草的组织培养及快速繁殖的研究二

录入时间:2009-7-6 17:20:42 来源：青岛海博

2.2 不同浓度激素对愈伤组织分化培养的影响
将上述继代培养的愈伤组织用无菌镊子分散成颗粒状后，接种到附加不同浓度的BA ( 0 、0.1 、0.3 和0.5 ）、NAA ( o 、0.1 和0.5 ）和IBA ( 0 、0.l 和0.5 ）的1/2MS + AgNO₃1.2 培养基上进行愈伤组织分化培养。每个处理接种外植体100 个愈伤组织颗粒。观察愈伤组织的分化情况；以对时统计愈伤组织分化颗粒数、分化率、每个愈伤颗粒分化不定芽数，并观察分化不定芽的长势。试验重复了5 次。由表2 可见，在单独使用BA 或不同浓度BA 与不同浓度NAA 配合使用的培养基上，颗粒状愈伤组织可以分化。从颗粒状愈伤组织的分化率、平均分化不定芽数和不定芽的长势看，在1/2MS + AgNO₃1.2 + BAO.3 + NAAO.1 的培养基上，不仅颗粒状愈伤组织的分化率达到了99 % ，平均每块愈伤组织的分化芽数达到7.1 个，而且分化不定芽长势好。观察表明，在这一培养基上诱导分化的不定芽培养到60d时呈嫩绿色丛生状，株高度多在0.5cm 以上，重复试验也得到了相同的结果。把上述诱导培养的不定芽从基部剪下，接种到相同的培养基上进行不定芽的继代分化培养。5 次重复试验，每代都继代培养7 代。结果证明，不定芽在这一培养基上经过礴侧的继代培养，每个不定芽平均可分化培养出5.7 个高0.5cm 以上、生长旺盛的不定芽，所培养的不定芽呈丛生状。这说明1 / 2 MS + AgNO₃1.2 十BAO.3 + NAAO.1 是诱导萍蓬草颗粒状愈伤组织和不定芽分化的理想培养基。
2.3 试管苗的生根培养
将上述诱导分化培养的高于0.scm 以上的不定芽，从基部剪下，接种到附加不同浓度NAA ( 0.1 、0.5 和1.0 ）、IAA ( 0.1 、0.5 和1.0 ）和IBA ( 0.1 、0.5 和1.0 ）的1/3MS 液体培养基上进行生根培养。每个处理接种100 个外植体，试验重复3 次，观察生根培养情况。结果表明，萍蓬草的不定芽在上述液体培养基中均能长出根，但生根率和根的生长状况差异很大，以附加IAA的培养基效果最好。尤其是在IAA 浓度为0.5 的培养基上，培养7 一10d 即可形成根原基，随后根系迅速生长，逐渐变绿，并很快形成根茎。培养到40d 时就可以成为具有长约2cm 的根茎、高4cm 左右、叶片伸展、根系发达、生长非常旺盛的试管苗。把具有根茎的试管苗切成具有一段根茎和1 一2 个叶片的根茎段，接种到相同液体培养基中进行生根继代培养，经过40d 的培养，又会培养成为一代具有根茎、根系发达、生长旺盛的试管苗。所培养的试管苗没有无效苗。进行3 次重复试验，每次重复试验继代培养5 代的结果证明：继代培养的试管苗根茎生长、生根率和长势都基本保持不变。平均每代的繁殖系数为4.2 。上述结果说明，1 / 3 MS + IAAO.5 的液体培养基是萍蓬草试管苗生根培养和生根继代培养的理想培养基。
2.4 试管苗移栽和移植
将具有生长旺盛试管苗的培养瓶瓶塞打开，放到光照4000~5000LX 、15 一27 ℃ 的条件下炼苗3~4d 后，从培养瓶中取出，移栽到下部具有一层厚10cm 以上园土、上面具有约2cm 深水层的温室人工水池中，在前10d 防止直射光照的条件下，3 次20 （旧株以上移栽试验，平均成活率为99.4 ％。将温室中移栽成活的试管苗于五到七月份移植到池塘的浅水区。移植成活率几近100 ％。移植的试管苗生长旺盛，根茎粗壮，根系发达。这说明萍蓬草试管苗在浅水中容易移栽成活。六月份移植的试管苗，九月份开花。
3 ．讨论
虽然国内现在已多有水生和湿地植物组织培养的报道，但迄今未见睡莲属植物组织培养、无性系建立和快速繁殖的报道。本研究以萍蓬草的嫩根茎为材料，进行了愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、不定芽的生根、试管苗的移栽和移植研究，成功的建立起萍蓬草嫩根茎无性系，达到了快速繁殖的目的。这不仅可以证明萍蓬草的非分生组织细胞也具有全能性，而且也为萍蓬草的工厂化育苗、满足人们的需要奠定了技术基础，同时还为该植物的转基因研究提供了可能。采用愈伤组织继代培养的方法，萍蓬草嫩根苹45d 的繁殖系数为36 ，按照这个速度进行快速繁殖，每年繁殖速度为368 ；采用不定芽继代培养的方法，40d 的繁殖系数为5.7 ，按照这个速度进行快速繁殖，每年繁殖速度为5.79 ；采用生根继代的方法，40d 的繁殖系数为4.2 , 按照这个速度进行快速繁殖．每年繁殖速度为4.29 。这说明不论采用哪种方法进行快速繁殖，每年都能繁殖出大量的试管苗，可以满足人们观赏栽培对萍蓬草种苗的大量需求。在上述三种方法中，虽然采用生根继代的方法是上述三种方法中最慢的一种，但是，由于采用生根继代方法进行快速繁殖培养的试管苗具有根系发达、生长旺盛、没有无效苗的特点，所以生产上应采用生根继代的方法进行快速繁殖。在进行液体生根培养中，培养的试管苗根系为绿色的。这不仅说明在缺氧的液体培养基中萍蓬草的根系能够形成叶绿体、并进行光合作用，而且说明萍蓬草试管苗能通过叶片和嫩中，满足代谢的需要，促进了试管苗的旺盛生长。

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