青钱柳愈伤组织培养条件研究的优化一
录入时间:2009-7-7 8:56:41
来源：青岛海博
摘要：本试验研究了青钱柳愈伤组织培养中0.1 ％升汞溶液的最佳消毒时间、最佳外植体选择和最适基本培养基。结果表明：以叶片做为外植体，0.1%升汞溶液的消毒时间应掌握在3 ~ 4 min 之内，以茎段做外植体，消毒时间应掌握在14 min 左右。从愈伤组织诱导率上看，以当年生幼嫩茎段做外植体诱导效果更佳。MS 和改良后的MS 在特定的激素配比下均可诱导出健康的愈伤组织，以改良MS 培养基＋2.0 mg / L6-BA + 0.1 mg / L NAA 愈伤组织诱导率最高达83.33 % ，更适合青钱柳茎段的培养。
关键词：青钱柳，培养条件，外植体，愈伤组织诱导率
青钱柳系胡桃科青钱柳属植物，为我国特有的珍稀树种，是国家重点保护的濒危植物之一。青钱柳是一种高大速生阔叶乔木，因其树形似柳，果实圆形似铜钱，色青而下垂，故名“青钱柳”。其根、枝、叶均可人药，具有明显的降血糖、降血压、减肥、抗肿瘤、抗衰老、抗过敏、清热解暑、提高人体免疫力、促进新陈代谢等多种功效，市场前景非常广阔。但青钱柳种子发育差，且具深休眠特性，扦插繁殖的成活率又很低，自然生长的数量很少，这在一定程度上制约了该树种的开发利用，对产品的继续开发利用造成了原料供应的困难。研究青钱柳的组织培养条件，使其苗木产业化，对加速青钱柳的开发利用具有重要意义。
1 材料和方法
1.1 材料的采集青钱柳来源于河南省南召县宝天曼国家自然保护区内海拔800m 以上的河谷溪流旁，于不同时间采集青钱柳当年生的嫩枝及嫩叶做为外植体，采后立即进行低温密封保鲜，经4h 的运输带回实验室立即进行材料的处理。
1.2 外植体的处理将采集到的嫩茎及嫩叶用洗洁精溶液浸洗0.5h ，再用流水冲洗lh ，以除去外植体表面的灰尘和部分菌体。沥水后，将嫩枝剪成1.5 ~ 2 cm的茎段（含有1 一2 个不定芽），叶片剪成1 cm*1cm 的方块，在无菌条件下用75 ％酒精对叶片和茎段消毒2 一3s，再用0.1 ％的升汞溶液对叶片和茎段进行不同时间（2 min 、3min 、4 min 、5min 、6min 、7 min ）的消毒，之后用无菌水冲洗4 次。接种前用无菌的剪刀将叶片四周、茎段两端剪去少许，接种在培养基上，每瓶接种1 个外植体，用双层锡箱纸封口。
1.3 愈伤组织的诱导本实验以MS 培养基和改良MS 培养基（除CaCl2、MgSO4全量外，其它元素为全量的3 / 4 , pH 6.0 ）为基本培养基。接种后用智能人工气候培养箱进行培养，培养温度设为（26 士l ）℃ ，光强度为1200 LX ，设12h 光照12h 黑夜交替进行的培养方式。20d 后进行愈伤组织诱导率的统计。诱导率=诱导出愈伤组织的外植体数／接种外植体数。
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