2 结果
2.1 外植体的消毒用0.1 %的升汞溶液对叶片消毒2min 、3min 、4min 、5min 、6min 、7min ,其污染率和愈伤组织诱导率见图1 。图l 显示,污染率和愈伤组织诱导率与消毒时间存在着一定的关系,随着消毒时间的延长,污染率逐渐下降,当消毒时间超过5 min 后,污染率为零。在3 一4 min 内,污染率较低、愈伤组织诱导率较高。随着消毒时间的继续延长,污染率和愈伤组织诱导率都下降,当叶片消毒时间为7 min 时,愈伤组织诱导率为O ,污染率也为O ,此时叶片呈褐色,说明消毒液对外植体细胞已造成严重毒害。所以用青钱柳叶片做外植体,消毒时间应掌握在3 一4 min 内,此时的污染率较低,愈伤组织诱导率较高。
用0.1 %的升汞溶液对茎段进行消毒,消毒时间设为6min 、8min 、10min 、12min 、14min 、16 min ,其污染率和愈伤组织诱导率见图2 。结果显示,随消毒时间的延长,污染率逐渐下降。愈伤组织诱导率在一定范围(8 一14 min )内与消毒时间呈正相关关系,当消毒时间为14 min 时,愈伤组织的形成率最高,达到83.33 % ,之后随消毒时间的继续延长,愈伤组织诱导率开始下降。故用茎段做外植体时,0.1 %升汞溶液的消毒时间应掌握在14 min 左右。
2.2 外植体的选择从2007 年7 月、9 月、2008 年5 月三个时间段采集的叶片和茎段做外植体,接种于改良MS + 6-BA 2.Omg / L 十NAA 0.5mg / L 的培养基上,进行外植体的选择,以期找到诱导愈伤组织能力强的最佳外植体。结果见表1 , 5 月采集的叶片和茎段做外植体,愈伤组织诱导较高,这可能是因为春季刚长出的嫩茎携带的杂菌较少,再生能力强,酚类物质含量较低的缘故。
2.3 不同外源激素和不同培养基对青钱柳茎段愈伤组织的影响本实验以MS 培养基和改良MS 培养基为基本培养基,两种培养基上均增加40 %多菌灵可湿性粉剂1.25g / L 和200mg / L 青霉素,再以二因素正交试验法设计外源激素(细胞分裂素6-BA 与生长素NAA )的配比方案(见表2 ) ,研究不同培养基对青钱柳茎段愈伤组织的影响,结果见表3 。
结果显示,MS 和改良MS 均可作为青钱柳茎段愈伤组织培养的培养基,在特定的激素配比下均可诱导出健康的愈伤组织,以改良MS 培养基十2.0 mg / L6-BA 十0.1 mg / L NAA 更适合青钱柳茎段的培养,愈伤组织诱导率为83.33 %。
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