7.免疫无论是感染，还是疫苗接种，VEEV均可诱导机体产生坚强而持久的免疫力。最初制备的VEE疫苗是1940年制造的福尔马林灭活鸡胚疫苗。应用该疫苗，有效地降低了感染马匹的死亡率。随后在技术上对这一疫苗进行了改进，制造了用于人的半提纯福尔马林鸡胚灭活疫苗，并研制出多种剂型，如加入皂素、吐温80或/和三丁酯磷酸盐(TNBP)等以提高疫苗的免疫效果，而且可使疫苗中可能残留的感染颗粒进一步灭活。71年应用细胞培养技术制备了福尔马林灭活的鸡胚细胞疫苗，动物实验证明，该疫苗可诱导产生高效价的中和抗体，获得较好免疫效果。但灭活疫苗的使用有一定的危险性。有人通过序列比较研究发现，1969～1972年间，美洲VEE的大流行可能是由当时使用的灭活疫苗中残留的活病毒引起，因为当时分离的流行株的基因序列与当时用于制备灭活疫苗的强毒TRD株的基因序列几乎没有区别。此外，曾多次发现某些灭活疫苗虽然已对实验动物没有感染性，但却仍可引起马和人的实验感染。因此，安全试验必须十分严格，除豚鼠和小鼠等实验动物以外，还应增加新出壳雏鸡(湿雏)和鸡胚的安全试验。有人怀疑过去疫病的发生在某种程度上与灭活疫苗的使用有关，因为在扩大使用弱毒疫苗后，VEE的发生明显减少，所以现在灭活疫苗基本不用，主要应用弱毒疫苗。弱毒活疫苗的研究开始于1946年。最为成功的弱毒活疫苗是用强毒TRD株(ⅠA/B)连续通过豚鼠胎儿心脏细胞培养减毒的TC83疫苗株。此疫苗毒株最初用于人(1963)，后来试用于马也极为有效(1967)。仅1969～1970年间，中美诸国和墨西哥等应用了200多万头份，对疫情收到了很好的控制效果。至1972年，已有1000万以上的马匹接种了TC83疫苗。萨尔瓦多一个40匹马的小群试验最能说明TC83疫苗的免疫保护力。在这40匹马中，35匹接种疫苗，另5匹未接种。一个月后该地区发生VEE的暴发流行,5匹未接种马全部发病死亡，而35匹疫苗接种马却都获得了保护。Walton等(1972)在尼加拉瓜进行了TC83疫苗的接种免疫试验，接种后4个月，89匹马中有83匹继续保持较高效价的中和抗体。因此该疫苗已广泛用于人和动物的免疫接种。实验研究证明，少数接种TC83疫苗的马匹可出现病毒血症，但持续时间不长，而且效价不高。约有半数动物的体温在接种后的1～2天升高1℃左右，但不出现临床症状。接种后3天即开始产生免疫力。通常一次注射即可产生坚强的免疫保护，血清阳转率高达95%。此外,福尔马林灭活的TC83疫苗也能产生较好的免疫效果。流行地区的马匹在每年流行季节前加强免疫一次。马驹在3月龄时首次免疫，6月龄时加强免疫一次。TC83弱毒疫苗不适合于怀孕母马，因为可能引起畸胎。弱毒疫苗的免疫效果可能受机体中已存在的其它甲病毒抗体的影响。如果是这样，可以用弱毒疫苗的灭活制剂加以解决。这种免疫对实验室内的病毒工作人员尤为重要。TC83可诱导针对ⅠA/B强毒株的免疫抗体，而抗ⅠD或E毒株甚至亲缘关系更远的其它亚型毒株的中和抗体滴度很低。最近研究表明，弱毒接种后产生的抗体有IgM和IgG。最近有人报道,人免疫后，中和抗体水平可持续5～25年维持在同一有效水平。免疫的动物还可抵抗呼吸道途径的强毒攻击。除常规疫苗外，基因工程疫苗也在研制中，目前有二种途径，一是在病毒全基因组cDNA克隆的基础上，通过体外定点突变技术，对毒力基因进行突变，使强毒变成弱毒或无毒株，而其复制及免疫原性又不受影响,目前已获得这样一个弱毒株；二是将VEEV的保护性抗原基因插入活病毒表达载体，构建活病毒载体疫苗，如Sviatchenko等(1993)将VEEVTRD株的26SRNA的cDNA插入痘苗病毒载体，所构建的VEEV重组痘苗病毒可有效地将囊膜糖蛋白表达到细胞膜上,小鼠免疫后可产生坚强的免疫力，并抵抗TRD强毒的攻击。虽然大部分小鼠缺乏中和抗体，但免疫可持续7个月以上。Mathews等(1994)将TC83弱毒株的E1和E2基因插入痘苗病毒载体，所构建的VEEV重组痘苗病毒注射小鼠后，可激活辅助性T淋巴细胞(Th)并伴随白介素2水平升高,同时还产生长时间的中和抗体，单次免疫16个月后，仍能测出中和抗体。
8.诊断根据流行病学和病马典型的神经症状，不难建立脑炎的暂定诊断，但是不能最后确定为哪一种脑炎，因此必须进行特异性诊断。而且应该指出，并非所有病畜都出现神经症状。由血液、脑脊髓、脾脏或鼻咽洗液等材料中分离和鉴定病毒是必要的确诊方法。在动物生前，特别是发病初期采取血液(最迟不超过5天)，较易分离到病毒。死后病料应选择脑和脾脏，但是必须在动物死后尽快采取，这是病毒分离能否成功的一个关键因素。鼻咽洗液主要用于检查人类病例。动物接种和细胞培养是简单易行的病毒检测方法。应用乳鼠、幼豚鼠作脑内接种或脑内皮下同时接种，是比较常用的病毒分离方法。也可接种于7～9日龄鸡胚的卵黄囊内或9～12日龄鸡胚的绒毛尿囊膜上，鸡胚通常在48小时内死亡,死亡鸡胚出血。据报道，应用新出壳雏鸡，亦即湿雏作脑内接种，可以提高病毒分离率。污染病料要用抗生素处理，随后再作接种。也可较大量地腹腔接种于离乳幼豚鼠。此外，应用仓鼠肾原代细胞、鸡胚或鸭胚细胞、Vero细胞和BHK21细胞等细胞培养物作病毒分离。细胞培养物通常在接毒后48小时左右产生细胞病变。细胞培养上清中的病毒抗原可以用ELISA法检测。应用荧光抗体技术检测培养细胞中的VEEV，可在48小时内得到结果，且与EEEV和WEEV病毒不出现交叉反应。结果证明荧光抗体法的特异性很高，虽然敏感性稍低于乳鼠脑内接种法，但是可在短得多的时间内获得结果。在南美、中美诸国和美国南部地区，对于新分离的VEEV还需要进一步鉴别其为流行株还是地方株,除可应用人工接种马匹或实验动物的经典方法以外，还可以根据新分离毒株的血凝最适pH及其在Vero细胞上的蚀斑形态进行判定。流行株的血凝效价在pH6时明显上升，而地方株常有较宽的pH域;流行株在Vero细胞上形成小而分散的蚀斑，而地方株经常产生大而边缘不清晰的蚀斑。但是TC83弱毒疫苗株也形成小型蚀斑。病畜体内特异抗体的检测对确诊有意义。病毒血症一旦消失即可出现HI和中和抗体。应用蚀斑减数中和试验(PRN)可以检测出针对某一亚型或变异株的抗体。Coates等(1992)比较了ELISA、免疫荧光染色(IFA)、免疫印渍、PRN和HI试验用于VEEV血清抗体诊断的效果，试验表明HI试验的敏感性不如前几种方法，IgG捕获ELISA敏感性较高，但特异性不如PRN、HI和免疫印渍。IgM捕获ELISA可用于早期诊断，实验感染后第4天可检测到IgM，第6天时，用ELISA、PRN、IFA均可检测到IgG，而HI和免疫印渍在第10天时才能检测出特异的抗体反应。结果表明ELISA可以检测特异IgM和IgG，而用PRN可进行确诊。与EEEV和WEEV一样，用于VEE诊断的分子技术正在研究之中，针对VEEV基因组3端的探针可以特异性地与VEEV杂交，而不与EEEV和WEEV杂交。
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