(2) 血清学诊断：包括补体结合试验、血凝抑制试验以及中和试验。血凝抑制抗体和 中和抗体存在于IgM和IgG两种免疫球蛋白中，而补体结合抗体只存在于IgG部分内。
① 补体结合试验：特异性较高，是流行病学上确认乙脑的一种常用方法。 但因补体 结合抗体的出现较晚，动物大多于发病后2周左右才呈阳性反应， 故只作为回顾性诊断 之用。作者等对小鼠作人工感染试验，在腹腔接种亚致死量乙脑病毒以后， 补体结合抗体于接种后11～12天达阳性效价。4匹人工感染马(见“病原性”节) 在接种 后10～14天开始呈现阳性效价。补体结合抗体在动物体内的维持时间不超过一年。通常以 被检血清1∶4稀释度呈“++”反应强度时判为阳性。 但因人及动物中隐性感染的大量存 在，近年来又普遍应用疫苗接种，因此，根据单份血清的测定结果，往往不能作出肯定 诊断。只有发病早期和恢复期双份血清的抗体效价对比，才有诊断价值。一般是在初诊 时和恢复期(病后2～3周以上)各采血1次，并在同一次补体结合试验中进行测定。 如果恢 复期血清比初诊血清的效价增高4倍以上，即可判为阳性， 说明患畜这次发病是由乙脑 引起的。 补体结合试验的操作方法请参阅本书第十四章。
② 血凝抑制试验：乙脑血凝抑制抗体较补体结合抗体出现得早， 一般在病后第4～5 天开始出现，病后2周左右达高峰。作者等发现小鼠在人工接种乙脑病毒后 的第7天即开始出现血凝抑制抗体。因此，测定血凝抑制抗体可以较早地作出诊断。 关于马骡血凝抑制抗体的阳性价，国内没有标准，作者等根据疫区和非疫区乙 脑流行期前后近200匹马骡血清的两次检测，初步规定1∶ 40以上的血凝抑制效价为阳性 感染价。对临床单个病例，也应按双份血清法判定，即恢复期血清的血凝抑制效价为急性 期的4倍以上者才具有诊断意义。 由于人和动物感染乙脑病毒后，血清中最先产生IgM抗体，数周后才出现IgG抗体， 此时IgM抗体已经减少乃至消失。因此，鉴定动物血凝抑制抗体是IgM还是IgG， 有 着早期诊断的意义。如果血凝抑制抗体是IgM，则即表示该动物是新近感染， 如果血凝 抑制抗体是IgG，则说明该动物是早先的感染。 测定IgM抗体时，一般应用2巯基乙醇(2ME)法。2巯基乙醇(HS•CH2•CH2OH ) 含 有巯基，可将大分子的IgM抗体裂解成7S的小分子球蛋白，后者没有免疫活性。因此， 比较同一血清在2ME处理前后的血凝抑制效价，即可查出血清中呈现免疫活性的抗体是 否就是IgM。但是必须指出，2ME裂解IgM的作用是可逆的。如果用透析法将2ME除去， 即可在一定程度上恢复大分子抗体球蛋白及其免疫活性。测定时必须充分注意。 如上述，乙脑病毒与墨累山谷脑炎病毒、西尼罗病毒和圣路易脑炎病毒比较接近， 在血清学上，特别是血凝抑制试验和补体结合试验中出现一定程度的交叉反应，但同种 病毒及其抗体之间的反应效价最高，仔细比较，不难鉴别。应用动态血凝抑制试验，更 易判定。
③ 中和试验：人或动物感染乙脑病毒后7天左右出现中和抗体。中和抗体在动物体内 的存在时间较长，可达一年以上。因此也需要进行双份血清测定才有诊断价值。中和 试验可在小鼠、鸡胚或组织培养细胞上进行。通常按固定量病毒和稀释血清的方法进 行，因为这样可以直接测出待检血清的效价(请参阅本书第十四章)。 王用楫报道用仓鼠肾原代细胞进行中和试验，方法是将各种稀释度的待检 血清01ml、10～100个TCID50的病毒01ml和维持液08ml充分混合，不用感作，直 接加入细胞培养管(小瓶)，于5～6天后判定结果。试用于豚鼠、马和儿童免疫前后的双份血 清，都获得满意结果。 ④ 酶联免疫吸咐试验(ELISA)：Chang等应用生物标记的蛋白A ELISA，检测人 、猴、猪、马、狗、野兔和鼠中的JEV抗体，得到满意的结果。Ohkubo等应用ESL IA进行了猪的JEV血清流行病学调查。
(3) 反转录多聚酶链式反应(RTPCR)： Murakami等应用套式RTPCR法检测到01ml全血标本中少至3～5个乙脑病毒粒子。 该 法与其它检测JEV抗原相比,高度特异、灵敏。
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