马流感病毒(Equineinfluenzavirus)
马流感是早有报道的疾病。Short(1749年)最早认为马流感与人类疾病可能有关。他谈到1688年在英格兰和爱尔兰发生人流感前，马就有类似人流感的症状。Thompson(1852年)也报道了1732年在英国爱丁堡发生人流感之前，有不少马匹发生咳嗽、流鼻涕等症状。Gibson(1754年)对这次马流感作了详细的记载，其临床症状和流行病学与现今观察到的马流感情况完全相符。现已充分证明，人和动物的流感病原是同属于正粘病毒科的流感病毒。不过在1955年以前，由于马流感的病原体尚未搞清楚，因而文献上所叙述的“马流感”，可能包括有马鼻肺炎、病毒性动脉炎、马传染性支气管炎、鼻病毒感染以及由流感病毒引起的马流感等多种疾病。近些年来，通过病原学和免疫学研究，对于上述各种疾病的病原体已经认识清楚。1956年Sovinova等在布拉格从流感病马体内分离出一株病毒，经鉴定为甲型流感病毒。命名为A/马/1/布拉格/1/56(即马甲1型)；1963年Waddell等在美国的迈阿密州，从马体又分离出一株在抗原性上与马甲1型流感病毒不同的甲型流感病毒，命名为A/马/2/迈阿密/1/63(即马甲2型)。到目前为止，马流感病毒只有这两个在抗原性上不同的亚型。这两个亚型病毒具有甲型流感病毒共有的补体结合性抗原，但血凝抑制试验和病毒中和试验有区别。根据多年来在各国所作的抗体调查和病毒分离试验结果，证明由这两株病毒引起的马流行性感冒，广泛分布于世界各地。马甲1型流感曾发生于瑞典、捷克斯洛伐克、罗马尼亚、前苏联、美国、墨西哥、丹麦、澳大利亚、德国、荷兰、波兰和英国；马甲2型流感曾发生于美国、巴西、英国、法国、乌拉圭、阿根延、意大利、罗马尼亚、澳大利亚、前苏联和日本。1974年夏到1975年春，我国一些省份也暴发了马流感，经过血清学检查以及病毒的分离和鉴定，证明是由马甲1型流感病毒引起的。1989年春又在东北地区发现了马甲2型病毒引起的流行，并且分离到了病毒。
〖BT4〗1.抵抗力〖HT5SS〗马流感病毒对外界抵抗力很弱，56℃加热数分钟即可丧失感染力。对紫外线、甲醛、稀酸等敏感。脂溶剂、合成去污剂、肥皂和氧化剂都能使病毒灭活。对低温的抵抗力较强，传染性鼻分泌物于5℃保存二天，仍可分离出病毒。在-20℃以下，病毒的活力可保存数月之久。
〖BT4〗2.培养〖HT5SS〗马流感病毒最易感染鸡胚，因此鸡胚最常用于病毒的分离培养。将被检病料接种于9～11日龄鸡胚的羊膜腔和尿囊腔内，35℃培养2～4天，可在羊水和尿囊液中获得大量的病毒。马流感病毒能在鸡胚成纤维细胞、仓鼠肾细胞、猴肾细胞、牛肾细胞以及仓鼠肺传代细胞培养物内增殖，但以鸡胚细胞培养物内的病毒感染价最高。也有用马肾细胞初代分离马流感病毒(马甲2型)获得成功的报道。感染细胞培养物内细胞病变的特征是形成合胞体，细胞肿胀变圆，稍晚则出现核圆缩，甚至脱落，并出现血凝和红细胞吸附特性。Yamagishi等比较了非洲绿猴肾(Vero,GMK－2)、牛肾(MDBK)、犬肾(MDCK)、猪肾(SK－K)以及来源自猪胚肾(ESK)的传代细胞系对马流感病毒迈阿密株和布拉格株的敏感性。结果证明这两株病毒均能在所有这些细胞系中增殖，并有致细胞病变作用，细胞变圆、聚团和最后崩解。但以来源自猪胚肾的ESK细胞最为易感。马流感病毒经鼻腔感染，可逐渐适应于小鼠，盲传数代后可使小鼠发生肺炎。部分或多数小鼠死亡。乳鼠经脑内注射马流感病毒可引起脑炎。对仓鼠经鼻接种病毒，也能引起感染。
〖BT4〗3.抗原性〖HT5SS〗马甲1型流感病毒的抗原组成为H7N7，马甲2型流感病毒的抗原组成为H3N8。如按1980年2月世界卫生组织会议所建议的流感病毒命名法，则马甲1型流感病毒的HA抗原与人流感病毒H3和禽类流感病毒H7相同；但在自然条件下，马和人流感病毒的种间交叉感染是不存在的，也没有交叉保护作用。马甲1型和马甲2型两个亚型病毒之间，也不能产生交叉免疫性。
〖BT4〗4.病原性〖HT5SS〗自然条件下，马流感病毒只引起马属动物发生流行性感冒，无年龄、性别、品种的差异。主要经呼吸道飞沫感染，亦可通过被污染的饮水、饲料经消化道感染，还能通过交配传染。病马退热后可能较长时间带毒和排毒，成为传染源。本病一年四季均可发生。北方地区以春夏之交多发。本病传播迅速，在易感畜群中短期内引起广泛流行，发病率极高，有时可达100%。马匹感染流感病毒后，经过1～3天的潜伏期，突然发生高热，有时可达40～41℃。呼吸、脉搏加速，精神沉郁，食欲减退。鼻粘膜潮红，发热时伴有干咳，后变湿咳，鼻孔有浆液性～粘液脓性分泌物。病马流泪、羞明，眼睑肿胀，伴有浆液—粘液乃至脓性分泌物。通常流感病马的症状比较一致，但由于病毒的毒力大小、个体抵抗力的强弱以及饲养管理的好坏而有所差别，主要在于轻重程度之分。病死率一般为01%～04%，不超过1%。但对未受母源抗体保护的幼驹，可较多地引起致死性感染。如在发病时或病愈后继续使役，可能引起严重的并发症，特别是胃肠炎和肺炎，则死亡率增高，有时超过5%。流感病毒经呼吸道侵入马体，对呼吸道粘膜有特别的亲和力。病毒侵入细胞后几小时，便在细胞内形成很多成熟的病毒粒子。随着感染细胞的破坏，病毒释放于呼吸道内，感染更多的粘膜上皮细胞，当病毒在上皮细胞内增殖达一定程度时，就引起局部组织的病理变化和全身症状。
〖BT4〗5.免疫〖HT5SS〗马流感病毒感染的获得性免疫是持久的。自然感染后的康复马有较长时期的免疫力。体内血凝抑制抗体也可保持相当长的时间。曾对1974年夏至1975年初在我国暴发的马甲1型流感自然感染后的部分康复马，逐年进行了血凝抑制抗体的水平调查，结果证明这些马匹至1980年仍保有一定水平的血凝抑制抗体。疫苗预防也有良好效果。目前使用的疫苗是以鸡胚增殖的马流感病毒，将其精制浓缩和灭活后制成的。有水剂疫苗和佐剂疫苗两种。如前所述，马流感病毒有马甲1型和马甲2型两个亚型毒株，通常就用这两个亚型毒株作为种毒制备疫苗。但是，各次流行时病毒抗原结构经常有变化，可能影响疫苗的预防效果。因此，应考虑使用当地流行时分离出来的毒株制备疫苗，其免疫效果更为理想。疫苗制造时，先将保存的马流感种毒，进行传代，提高和稳定种毒的血凝效价。马甲1型和马甲2型可以制成二价疫苗。二价疫苗不仅使用方便，免疫效果也较理想。现将疫苗的制备程序简要概括如下。按常规将保存的两个亚型种毒启封后，进行鸡胚传代，当血凝滴度稳定在1∶640以上时，即可作为种毒使用。应用9～11日龄的鸡胚增殖病毒，经尿囊腔途径接种病毒尿囊液02ml后，置33～35℃温室中培养48小时。随后将鸡胚移至普通冰箱过夜，以减少出血。翌日将鸡胚取出，按无菌操作程序将尿囊液吸出，收集于灭菌瓶中。立即进行无菌试验和血凝效价测定。而后向感染尿囊液加入5%福尔马林，使福尔马林的最终含量为005%，加塞并充分振荡后，置于4～8℃冰箱中进行灭活，持续7天，每天振荡一次。灭活期满后，取样进行病毒灭活效果试验。应用福尔马林灭活苗免疫马，所产生的免疫保护作用仅能维持3个月，这一方面取决于疫苗自身的免疫原性，更重要的是马匹本身对疫苗免疫的反应能力。为了提高疫苗的免疫力，可加入氢氧化铝或油类等佐剂。检定合格的单苗，按马甲1型1∶640血凝价、马甲2型1∶2560血凝价的比例，将两种单苗混合后即为二价疫苗。关于马匹的免疫注射程序问题，实验证明马匹在第一年以三个月的间隔接种二次，以后每年接种一次即可。免疫母马所产的幼驹，可通过初乳获得1～2个月的被动保护力。这些幼驹，应在3月龄注射疫苗，6个月再强化注射1次。高免血清也能提供近3周的保护力，主要用于易感幼驹和贵重种马。关于马流感弱毒疫苗的应用，尚未见有报道，其主要原因在于注射后能引起全身反应。
〖BT4〗6.诊断〖HT5SS〗本病发病快，传播迅速，几天内便可波及全群马属动物。且无年龄、性别的差异，而临床症状又比较一致。根据这些临床表现和流行病学材料，通常即可作出初步诊断。实验诊断多采用血清学试验或病毒分离。常用血凝抑制试验测定患畜的急性期和恢复期双份血清，如抗体升高4倍以上，即可诊断为流感病毒感染。急性期血清应在病马发病2～3日内采取，恢复期血清最好在发病后2～4周采集。双份血清必须在同次试验和相同的条件下进行，以保证结果的可靠性。血清抗体检测方法还包括ELISA、单向辐射溶血试验(SRH)等。病毒定性诊断方法有荧光抗体法、间接荧光抗体法等。病毒分离一般采取急性期病马鼻腔分泌物，以羊膜腔(或同时接种尿囊腔)途径接种9～11日龄鸡胚，置35℃孵育3～4天后，分别收获尿囊液和羊水。取收获物一部分作血凝试验，另一部分继续作鸡胚继代。如出现血凝，可与标准阳性血清作血凝抑制试验、最后定性。经鸡胚盲传3～5代仍为阴性的标本，判为阴性结果。
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