树莓组织培养技术

树莓是近年来世界上发展最为迅速的、集营养与保健于一身的第三代新兴水果。由于现有树莓繁苗方式落后，所采用的扦插、根孽、压条等传统繁殖方法繁殖系数低、速度慢，致使苗木供应不足，成为目前发展树莓生产的主要限制因素。本试验探讨了红树莓系列品种― 澳洲红的顶芽及腋芽培养技术，旨在解决这一品种繁育难的问题。
1 材料和方法
1.1 材料
材料取自牡丹江林业科学研究所引种的澳洲红1 年生枝条。外植体的选取分为两种，一是生长旺季时枝条中部带腋芽茎段；二是早春腋芽萌动前，取枝条于室内水培，腋芽刚萌动时剥取的茎尖。
1.2 灭菌方法
取健壮树莓植株，将枝条除去叶片，在自来水下用细软毛刷轻刷表面，并吸干表面水分，剪成2 一3cm 长带芽的茎段。按以下程序进行灭菌处理：将材料放人高温灭菌过的烧杯中一加入70 ％的酒精，浸5 ~ 7s 一倒出酒精，用无菌水冲洗2 遍一用0.1 ％的HgCl 消毒8 ~10min ，用无菌水冲洗5 遍，每次2 min 一切去材料受伤面，将带芽茎段切成长度为0.5 ~ 1.0cm 的单芽小段，或剥除芽鳞切取长度5 一7mm的茎尖，接种培养。
1.3 起始培养
取消毒过的外植体茎尖和带芽茎段，分别接到起始培养基上。培养基各项指标为：MS + 6BA0.2 ~1.5mg/L，蔗糖30 g/L ，琼脂4 g/L , pH 5.6 ~ 5.8 ，培养温度25 士2 ℃ ，光强1500~ 2000lx ，光周期12 ~ 14h / d。
1.4 增殖培养
当外植体萌发展叶分化成芽丛后，将丛生芽分成单株，转接到MS 附加不同激素浓度的继代培养基上进行增殖培养。增殖培养基为MS + 6BA 0.5 ~ 1.5 十NAA0.05~0.2mg/L 。将各阶段的激素浓度分为3 ~ 4 个梯度，采用不完全实施的正交设计，每处理20 个外植体，5 次重复。
1.5 生根培养及炼苗
选取生长健壮的单个丛生芽接种于培养基l / 2MS + 6-BA 1.0mg/L, 2 ％蔗糖上。根长至0.5 ~1 cm 时，把试管瓶移到室温条件下进行炼苗，一段时间后进行移栽。
2 结果与分析
2.1 外植体的选择对树莓组培苗的影响
采用生长旺季时枝条中部带腋芽茎段作为外植体，存在三个方面的问题。一是外植体大，消毒不完全，污染率高；二是外植体易褐变，实验表明培养基中加人0.25 ％的VC 可有效抑制褐变；三是将得到的无菌小苗转人增殖培养时，玻璃化现象严重，增加琼脂浓度或降低6-BA 浓度均不能有效抑制玻璃化。而用茎尖作外植体时，由于腋芽表面被鳞片，在较长时间消毒后，内部芽体损伤较小，既保证了消毒效果，又避免了消毒对培养材料的损害。同时枝条经水培后，体内酚类物质减少，褐变现象消失。接种于起始培养基中，10d 后，腋芽基部开始有膨大，腋芽开始萌发，40天左右可形成丛生芽团，但不同的6-BA 浓度，其诱导的效果有所不同：低浓度的6-BA ，诱导的芽数量少但健壮；高浓度的6-BA ，诱导的芽数量多但较细。综合来看，6-BA 浓度1.Omg/L 时，诱导效果最好，芽较多且生长健壮。
2.2 芽诱导分化及丛芽的增殖
将起始培养中未污染的芽长至2 一3 cm 时转接于增殖培养基上。20d 后，每个芽体可分化出1 一11 个新芽，外源激素是诱导芽增殖的关键物质，适宜的激素组合可以使芽的增殖系数达到最高。实验结果表明，随着激素浓度的增加，增殖系数变大，但分化出的芽矮小细。综合来看培养基MS 十6-BA 1.Omg/L 十NAA 0.2mg/L 是工厂化育苗较适宜的增殖培养基。芽长势好，且健壮。
2.3 根的诱导和试管苗炼苗移栽
单个丛生芽接种于生根培养基l / 2Ms + IBA1.0mg/L 、2 ％蔗糖上，10d 后切口基部出现白色的根状突起，25d 后，形成较多的根，每株生根4 条以上，生根率为80 ％以上。
移栽前5 天左右，在室内将封口膜打开1 / 3 左右，使幼苗与空气有一定接触。2 天后，移栽到驯化温室内，使幼苗完全暴露在空气中，要适当遮荫，避免高温和强光直接照射，3 天后即可移栽。移栽时将幼苗取出，小心洗去根部的培养基，去掉老叶，放人铺有湿报纸的盒子，要注意保湿。栽培基质为消毒后的黄沙，用镊子划痕后，夹住幼苗根部，插人至第一轮叶，用手小心压紧，用薄膜覆盖，保持温度在21 ℃ 一25 ℃ ，控制好水分和温度，移栽成活率可达80 ％以上。
3 小结
3.1 培养材料的选择是树墓组培快繁的关键，试验表明茎尖是最合适的培养材料，腋芽表面的鳞片可避免长时间消毒对内部芽体的损害，同时，培养材料小，褐化现象明显减少。
3.2 掌握HgCl 消毒外植体时间是关键，消毒时间太短不能彻底灭菌，时间过长则可能杀死部分外植体，合适时间以10min 为宜。同时，消毒可分两次完成，每次5 min ，中间用无菌水清洗3 次，可减少Hgcl 对外植体的损害。
3.3 澳洲红组织培养中，MS + 6BA 1.0mg/L + NAA 0.2mg/L 是较适宜的增殖培养基，l /2MS + IBA1.0mg/L , 2 ％蔗糖是较适宜的生根培养基。试管苗生根数在4 条以上，且根长1.Ocm 以上时，移栽成活率可达80 ％以上。

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