野菊嫩茎的组织培养二
录入时间:2009-7-13 11:05:59
来源：青岛海博生物
2 试验方法
2.1 野菊嫩茎的选择
试验材料在2007 年10 月29 日上午10 : 00 采取。选生长健壮无病虫害的野菊植株，从新分生的枝条上剪取幼嫩带尖茎部15cm 左右，作为外植体使用。
2.2 野菊嫩茎的处理
将剪取的嫩茎带回实验室，将茎上的叶片连带叶柄一同剪掉，但叶柄基部留下5mm以保护侧芽，避免侧芽在灭菌过程中受损。将去掉叶柄的嫩茎剪成长约2cm 左右的小段。放在脸盆中用流水冲洗约5 min ，再用稀释的洗洁精漂洗约10 min ，最后用流水洗净，放人灭过菌的三角瓶中以待灭菌。灭菌时，将75 ％的酒精倒人盛有嫩茎小段的三角瓶，接着倒出进行表面灭菌，而后用0.1 ％的升汞溶液灭菌3 min ，最后用无菌水冲洗3 一4 次，在超净工作台上将其接种于培养基上。
2.3 培养基的选择
由于野菊花同观赏菊花同科同属，据资料介绍，用于菊花培养的培养基有：MS 、White 、N6、B5等，一般采用MS 为基本培养基，添加各种激素进行培养图。诱导培养基为：MS 十BA 1mg/L + NAA 0.lmg/L , pH 为5.8 左右，培养的温度范围是24 一26 ℃ ，光照强度是1 500 一3 00Olx ，每天照光约12h 。继代培养基为MS 或MS + BA 0.2mg / L 十NAA 0.5mg / L 的培养基上。生根培养基为1 / 2 MS 十NAA 0.1mg/L。另外，各培养基中均加琼脂粉5.5 g/L ，蔗糖30g / L.
2.4 组培苗练苗
将瓶苗移出培养室，放在准备室内，打开瓶口封口，将瓶苗室温放置2 一3d 后，进行移栽。将实验田翻耕，使耕作层土层疏松，整理出畦。在土壤上面铺一层约5cm 的蛙石，浇透水。将小拱棚支架搭好备用。将双斜面小棚打成屋脊状或三角形，拱棚南北走向，中间设一条拉杆，可起到坚固抗风的作用阁。一般棚内相对湿度可达70 % ~ 100 % ，白天通风时，棚内相对湿度可保持在40 ％一60 % ；夜间密闭时可达到90 ％以上。棚内地温比露地高5 一6 ℃ ，有利于再生苗的生长和提高再生苗成活率。当瓶苗根长至2cm 左右时，用镊子轻轻取出，用流水将瓶苗根部的培养基冲洗干净，然后栽在准备好的蛙石中，随后用喷壶浇一遍透水，将棚膜罩上，以水压边。白天气温过30 ℃ 时用遮阳网遮荫。驯化过程中通过通风、遮荫、洒水使棚内温度白天保持在25 ℃ 左右。待白天气温稳定在28 ℃ 以上，生了新根约3cm时，可去膜移栽。3 结果与分析
3.1 野菊嫩茎侧芽的诱导及生长状况
接种后第2 天，野菊嫩茎外观呈嫩绿色，水渍状，与灭菌前无异。未发现染菌。第3 天野菊嫩茎体表有针尖般小黑点，极少部分腋芽已开始萌动，部分叶柄有于枯现象，未发现染菌。第4 天大部分野菊嫩茎体表水渍状消失，留有顶芽和侧芽的饱满嫩茎上的芽开始生长。部分叶柄短的嫩茎上部有褐色水渍状现象，这部分芽未萌发。第5 天野菊嫩茎体表水渍状消失，叶柄大部分干枯，侧芽萌发在90 ％以上，大小如小米粒的一半，茎尖幼叶有展开迹象。第6 天野菊嫩茎茎尖幼叶已展开，侧芽大部分萌发。第8 天后多数芽已展开，茎段上黑点明显。第9 天幼芽生长良好，但展开的叶片边缘有焦枯现象。第10 天后部分茎尖呈水渍状，生长好的，叶片已完全展开，翠绿，叶面干燥。大部分芽生长良好，部分抽出了嫩枝（注：黑点为灭菌过程中升汞对其体表的损害；继代转接一次，培养基为MS + BA 0.2mg/L + NAA 0.5 mg/L ）。
3.2 野菊嫩茎的继代增殖培养
当茎尖及腋芽萌发生长，长到距离瓶口约1 cm ，即高约6~ 7cm 时可进行增殖培养。嫩茎生长一段时间后，下部可分化出大如黄豆的棕褐色组织，但芽少有分化。将嫩茎上诱导萌发的腋芽切成数段，每段带1 芽1 叶，进行短枝接种增殖培养。将其基部插人MS 或MS + BA 0.2 mg／L 十NAA 0.5 mg/L 的培养基上，约4 周后腋芽长成小植株。3.3 瓶苗的诱导生根
野菊继代长成的小植株部分被转人生根培养基1 / 2 MS + NAA 0.lmg/L ，部分继续增殖培养MS 十BA 0.2 mg/L + NAA 0.5mg / L 。5d 后，有少部分瓶苗其根长至2 mm ，部分还处于根原基状态，只有小突起，大部分还是未萌动的。株高有所增加但不太明显。叶色黄绿，有些小叶已经干枯，但整体长势较好；8d 后，绝大部分已生根约2 mm，其叶色开始转绿，整体长势较好；9d 后，有少部分瓶苗根的长度已长至lcm ，大部分在0.5 ~0.7 cm 左右，株高无大的变化，但其粗度明显增加，叶色由黄绿转为绿色，长势较好。
3.4 组培苗练苗
练苗的野菊再生苗长势很好，仅在1 周左右即长出新根。2 周后其叶色浓绿，茎秆呈紫褐色或嫩绿色，粗壮。这时可进行移栽。
4 结语
该研究发现以野菊的嫩茎作为外植体进行组织培养，培养基要求不苛刻，诱导、继代培养及生根培养均可成功操作。并且瓶苗的练苗也非常成功，说明野菊再生根的能力很好。通过试验了解到，野菊的嫩茎可进行组织培养，而且见效快，为野菊的快速繁殖开辟了广阔的前景。
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