狂犬病病毒可在鸡胚内增殖。应用5～6日龄鸡胚作绒毛尿囊膜接种，病毒(特别是固定毒)可在绒毛尿囊膜和鸡胚的中枢神经系统内增殖，病毒滴度上升，直至鸡胚达12日龄，此后病毒滴度逐渐下降。狂犬病病毒可在原代鸡胚成纤维细胞以及小鼠和仓鼠肾上皮细胞培养物中增殖，并在适当条件下形成蚀斑。但是必须指出，虽然许多种类的原代和继代细胞都可支持狂犬病病毒的生长，但细胞培养物内的感染细胞较少，细胞病变不明显，病毒产量甚低，这是因为狂犬病病毒具有较高细胞结合性的缘故。适应于鸡胚成纤维细胞的毒株，如Flury毒株的LEP和HEP病毒，在细胞培养物中的病毒产量较高，可以用于制造疫苗。Kissling等由1958年开始，将狂犬病街毒及固定毒株在原代仓鼠肾细胞中连续传代获得成功。1960年，加拿大Fenje等用原代仓鼠肾细胞制成人用疫苗。以后又将仓鼠肾细胞毒株，分别适应于鸡胚成纤维细胞及猪肾细胞。Atanasiu等应用小鼠脊管膜瘤细胞系于狂犬病街毒和固定毒的培养，观察到细胞病变和胞浆内的涅格里氏小体。BHK21细胞对狂犬病病毒极为敏感，产生明显的细胞病变，并已成功地用于血凝素抗原的制备、细胞内狂犬病病毒合成及其形态的电子显微镜研究以及疫苗生产。Vero细胞也常用于动物狂犬病毒疫苗的生产。狂犬病病毒可在兔内皮细胞系中长期增殖，适于作病毒增殖和装配等过程的观察。培养液中存在免疫血清，并不影响病毒的细胞到细胞的传播。但如免疫血清和补体同时存在，则可使感染细胞溶解。蝰蛇细胞系(VSM株)对狂犬病病毒甚为敏感，滴度可达107PFU/ml以上。人二倍体细胞如WI38、MRC5和HDCS株等，也常用于狂犬病病毒的培养。营养液内加入DEAEdextran(50μg/ml)，似可提高病毒的吸附和侵入率。接种病毒的组织培养细胞可用常规的单层或旋转培养法培养，悬浮培养也已成功。培养液的最适pH为7.4～7.6，适宜温度范围为30～40℃，但低温培养(32℃)尤为适宜。在研究狂犬病病毒在细胞培养物内的增殖周期时，发现BHK21细胞在感染后能够继续生长并分裂。应用荧光抗体检查，可在胞浆内见到大块的病毒特异抗原。因此，常采用同步接毒法培养病毒。而在其它细胞培养物内，则常只能见到散在于整个胞浆内的小荧光颗粒。狂犬病病毒可在组织培养细胞内形成胞浆内包涵体。感染细胞培养物可能发生细胞溶解，但也经常发生慢性感染，虽然长期产生病毒，但细胞生长不受明显影响。在鸡胚成纤维细胞培养物内，即使是高度适应的Flury病毒HEP株，于接种后48小时，也只1%左右的细胞的胞浆内含有病毒抗原。但在第6天，荧光细胞可能增加达100%。电镜观察，可在接毒后培养1天的细胞胞浆内看到均质性物质—毒浆，其中具有大量丝状的核衣壳结构，随后逐渐形成光学显微镜下可见的嗜酸性包涵体。包涵体内或在其附近见有大量的典型子弹状病毒粒子(许多是没有核心的中空粒子)。病毒粒子在胞膜或胞浆空泡膜上出芽成熟，同时获得外膜(囊膜)。接种狂犬病病毒于乳鼠(小鼠或仓鼠)脑内，可以获得高滴度的病毒，因此,乳鼠常被用于进行毒株的传代。
上一篇：狂犬病病毒抗原性
下一篇：狂犬病病毒分布
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
