主要用于疫苗效果检查或流行病学调查，包括小鼠中和试验、空斑减少中和试验、血凝抑制试验等。WHO推荐以快速荧光灶抑制试验(RFFIT)代替小鼠中和试验。试验时血清样品首先灭活，作倍比稀释，同时设阴、阳性血清对照。病毒通常采用标准固定毒CVS株。细胞为BHK21细胞系，细胞浓度为10５/0.2ml。首先将稀释的被检及对照血清0.1ml分别加入96孔培养板中，再在各血清孔中分别加入0.1ml标准病毒稀释液(100TCID５０)，混匀，37℃中和1.5小时；然后每孔加入10５细胞，于37℃5%CO２温箱培养24小时，次日倾弃培养液，用pH7.60.01mol/LPBS洗一次，用3%冷丙酮液于-20℃固定10～１５分钟，弃之，干燥后，加荧光标记的抗狂犬病病毒IgG液,室温感作30分钟，馏水洗涤3次(5min/次)，再以0.1%伊凡思蓝染色30秒，馏水洗涤3次(3min/次)。封载后镜检。在阴、阳性对照成立的基础上，比较实验组和阴性血清组的荧光灶，实验组中能使荧光灶抑制大(等)于50%的血清最高稀释度(倍数)，即为被检血清的中和抗体滴度。一般情况下,阳性对照血清的起始稀释效价为2IU/ml。待测抗体的单位，可通过计算待测抗体和标准血清滴度的比值得出。其公式：〖JZ〗待测抗体单位(IU/ml)=〖SX(〗待测血清IF抑制滴度〖〗标准血清IF抑制滴度〖SX)〗×2一般以0.5IU/ml判定为抗体阳转的最低效价，即表示机体对狂犬病病毒感染具有抵抗力。此外，为了检测动物体内的狂犬病病毒抗体，李金中等还报道了ELISA阻断法，即先包被已知阳性抗原，用被检血清与固定抗原感作，洗涤后，再加已知酶标记的阳性血清，洗涤显色后，出现颜色反应则表明待测血清中无特异性抗体。未呈现颜色反应的样品,说明血清中有狂犬病病毒特异性抗体，酶标抗体的结合被阻断,因此判定为狂犬病病毒抗体阳性。此外，还有斑点免疫测定、对流免疫电泳、Western印迹等诊断方法，在此不一一赘述。在人畜被狗等动物咬伤后，不可将这些动物立即杀死，应关在铁笼内饲养2～3周。如果动物在这几周内不出现狂犬病的症状，按照多年来通用的规定，可以认为此动物未患狂犬病。但如前述，由于近年来常在狂犬病疫区发现“顿挫型感染”，这些动物本身可能不出现狂犬病的症状，但其唾液内含有病毒。应用上述血清学试验作双份血清检查，可能有助于这些顿挫型患畜的检出。
上一篇：狂犬病疫苗病毒分离
下一篇：狂犬病疫苗分子生物学诊断:
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
