根据临床症状和流行病学资料，不难作出暂定诊断。牛流行热发生于夏末秋初，短期内广泛传播，但只发生于牛，特别是黄牛和奶牛。病牛明显发热，跛行或卧地不起，并有严重的呼吸困难，皮下常见气肿。为了确诊，可采病牛急性期血液或血沉管内的白细胞层，脑内接种乳鼠、乳仓鼠，常能分离到病毒。连续传代常可使潜伏期不断缩短：第一代约6～10天；第二代5天左右；至第6～8代，仅2～3天即可使乳鼠全部发病死亡。分离到病毒以后，即可应用乳鼠或细胞培养物与已知标准免疫血清进行中和试验鉴定之。标准免疫血清通常以强毒人工接种犊牛而制得。效力测定时，将其与10-２稀释的牛流行热感染鼠脑等量混合，应对2～3日龄乳鼠有100%的保护力。阴性对照血清应对上述鼠脑毒10-5～10-6不呈现保护。将待鉴定病毒的感染鼠脑，以PBS作成10-2和１０－３两个滴度，各以0.25ml分别加入等量标准免疫血清和阴性对照血清，并加青霉素1000U/ml、链霉素1000μg/ml。充分混合后，置4℃感作4小时，随后分别脑内接种2日龄乳鼠，每组5只，每只0.02ml。如果标准免疫血清组乳鼠全部或大多活存，而阴性对照血清组乳鼠全部或大多死亡，则即可以证明待鉴定病毒就是牛流行热病毒。国外曾报道用蚊细胞盲传分离病毒。为了达到早期诊断的目的，也可利用分离的白细胞进行负染，作电镜检查确诊。血清学检查应用以感染鼠脑或经BHK21细胞克隆传代的病毒制造的抗原，检测病畜急性期和恢复期的双份血清做中和试验或补体结合试验或间接免疫荧光试验。Zakrzewski等(1994年)建立的检测牛流行热病毒特异性抗体的阻断ELISA法，由于采用针对该病毒糖蛋白G1抗原位点的单克隆抗体，只对牛流行热病毒发生结合反应，而与相关病毒(如Berrimah,Kimberley病毒等)无交叉反应，因此与病毒中和试验相比，敏感性更高，操作更简单。是目前诊断及检测临床牛流行热的最好方法之一。其操作原理是:首先包被抗原，然后加上1/8稀释的待检血清，空白对照加PBS,结合一定时间(2小时)后,弃去未结合抗体,加抗G蛋白G1抗原位点的生物素标记抗体,感作一定时间(1小时)，弃去未结合生物素标记抗体后，加亲和素辣根过氧化物酶复合物感作后显色。然后根据OD值计算待检样品孔中的百分抑制作用。
上一篇：牛流行热病毒生态学与免疫
下一篇：水疱性口炎病毒
海博微信公众号
海博天猫旗舰店
