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大肠菌群及大肠杆菌测定(FDA与ISO对比)



录入时间:2009-8-12 9:21:53 来源:食品伙伴网

大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名,而是根据卫生学方面的要求,提出的与粪便污染有关的细菌,即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验,可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌(俗称大肠杆菌)、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。 
 
大肠杆菌的定义
大肠杆菌(也称大肠埃希氏菌),分类于肠杆菌科,归属于埃希氏菌属。
大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验(靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验)为++--或-+--的细菌。
与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌,包括五种:肠毒素性大肠杆菌(ETEC)、致病性大肠杆菌(EPEC)、出血性大肠杆菌(EHEC)、侵袭性大肠杆菌(EIEC)、黏附性大肠杆菌(EAEC)。
 
卫生学意义
大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标,作为食品中的粪便污染指标。
食品中检出大肠菌群,表明该食品有粪便污染,既可能有肠道致病菌存在,因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低,表明了粪便污染的程度,也反映了对人体健康危害性的大小。
大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近,它的出现预示着某些肠道病原菌的存在,因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。近年来,有些国家在执行HACCP管理中,将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。
 
大肠杆菌的生物学特性
 
基本形态:
此菌为两端钝圆的短小杆菌,一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm,多单独存在或成双,但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛,但多数只有1-4根,一般不超过10根,故菌体动力弱。多数菌株有菌毛,有的有荚膜或微荚膜,不形成芽孢,对普通碱性染料着色良好,革兰氏染色阴性。
 
培养特性:
大肠杆菌合成代谢能力强,在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃,在42-44 ℃条件下仍能生长,生长温度范围15-46 ℃。
大肠菌群及大肠杆菌测定
  ——MPN法检验流程(FDA BAM)
1、检样50g+450ml稀释液
2、适当十倍稀释样品
3、选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液,每个稀释度接种三管LST肉汤(每管9mlLST肉汤并加有导管),每管接种1mL。在35℃下 ,培养24 ± 2h ~48 ± 2h。
4、(1)没有产气管→报告阴性
(2)有产气管:①接种BGLB肉汤管→查MPN表报告结果(大肠菌群)
                            ②接种EC肉汤 →在44.5±0.5 ℃ (水浴培养)24 ± 2h ~48 ± 2h。
                            →产气管接种EMB平板(35℃、18~24h),从EMB平板上挑取5个可疑菌
                            转接到PCA斜面,进行革兰氏染色、IMVC生化鉴定、接种LST复检产气  
                            →查MPN表报告结果(大肠菌群)。               
大肠菌群测定——MPN法检验几点说明
MPN检索表:
   MPN检索表只给了三个稀释度,如改用不同的稀释度,则表内数字应相应降低或增加10倍。
初发酵和证实试验:
    1)两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同,但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义,即“在37℃分解乳糖产酸产气”。
    2)初发酵阳性管,不能肯定就是大肠菌群细菌,经过证实试验后,有时可能成为阴性。有数据表明,食品中大肠菌群检验步骤的符合率,初发酵与证实试验相差较大。因此,在实际检测工作中,证实试验是必需的。
产气量与倒管:
    在乳糖发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上浮,即应考虑可能有气体产生,而应作进一步试验。
大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别
EMB平板典型大肠杆菌菌落特征:                     
中心黑色或紫红色,有或无绿色金属光泽
大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别
EMB是一种弱选择性培养基,一些球菌也可在该培养基上生长;l高压灭菌可使得美蓝还原从而使培养基的颜色呈不均一橘黄色,轻轻摇动培养基可以恢复原有的正常紫色,倾注平板前应先摇匀;
大肠杆菌在该培养基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽;
该培养基受可见光易使其中的成分氧化,储存及培养细菌时都应在避光条件。
 
大肠杆菌测定——革兰氏染色
基本步骤:
将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染液,染1min,水洗;
滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;
滴加95%乙醇脱色约15~30s,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗;
滴加番红复染液,复染1min,水洗、待干、镜检。
结果:革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色
 

 

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