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猫泛白细胞减少症病毒



录入时间:2009-8-18 10:33:45 来源:青岛海博

 猫泛白细胞减少症病毒(Felinepanleukopeniavirus)〖BT)〗〖HT5K〗同义名:猫细小病毒,猫传染性肠炎病毒,猫瘟病毒,猫泛白细胞减少症病毒(FPV)引起的传染病以高热、呕吐、白细胞严重减少和肠炎为特征。猫传染性肠炎从本世纪三十年代起,就被一些欧、美学者发现。但病毒的首次分离培养是在1957年(Bilin)。后来Johnson(1964)从一头患类似猫传染性肠炎症状的豹的脾脏分离出了同样的病毒,并鉴定为细小病毒之后,才对本病的研究取得了显著进展。通过对多种动物类似疾病的病原学研究,证明FPV在自然条件下感染猫科和鼬科多种动物,如虎、豹、狮子和浣熊,但以体型较小的猫科动物,包括水貂最为易感。FPV是目前本属病毒中感染范围最宽,致病性最强的一种。因此也是本属中的主要病毒之一。  由FPV引起的猫泛白细胞减少症,可能存在于世界各地。在欧洲和北美已被认为是猫的重要传染病之一。同时,本病毒还能侵袭属于猫科的多种野生动物,因此,其分布的范围之广是可以想象的。我国张振兴和李刚等人(1982~1984)报道,江苏、安徽、山东、河南、河北、浙江、湖北、四川、陕西、山西等地均有本病发生,并先后从发病或死亡的猫和云豹等动物中分离获得了病毒。
1.形态和理化学特性  病毒粒子外观与本属其它病毒相同,直径20~24nm。核酸由单股DNA组成。DNA的分子量为17×106,G+C含量为47%。DNA分子量占有病毒粒子总量的285%。病毒粒子的分子量为59×106。衣壳可能由三种多肽组成,分子量为60kDa的占86%,73kDa的占10%,分子量最小的第三种多肽为39kDa,占3%~6%,衣壳中含有约5000nt的单链DNA。  象本属其它病毒一样,本病毒对外界因素具有强大的抵抗力。能耐受66℃30分钟加热处理。50%甘油盐水中的含毒组织,在普通冰箱内可保存35~138天。在25℃保存5天的含毒脏器,病毒滴度不降低。Earle液内的含毒组织,无论放置在4℃还是25℃,经13个月,毒力毫不降低。对乙醚、氯仿等脂溶剂和胰蛋白有抵抗性。05%福尔马林能有效地杀灭病毒,是良好的消毒剂。
2.血凝性  本病毒系本属中血凝性最弱者之一,仅在4℃下对猴和猪的红细胞有凝集作用,此点在病毒鉴定上有一定意义。
3.培养  本病毒能在仔猫肾、肺、睾丸、脾、心、膈肌、肾上腺、肠、骨髓和淋巴结的培养物内增殖,其中以前三种脏器的细胞较为常用。除猫的细胞外,还能在来源于水貂和雪貂的组织细胞内增殖。同本属其它病毒一样,要在细胞形成单层以前接种病毒,才能达到病毒大量增殖的目的。虽能产生细胞病变,但在不染色的标本上难以识别,为此,可将放入培养瓶的盖玻片(飞片)定期取出,经H.E.或Giemsa染色后进行镜检。当接毒剂量较大时,经10~12小时,首先出现核仁肿大,其外围绕以清晰的晕环。经24小时,少数细胞出现核内包涵体,开始呈嗜酸性,逐渐变为嗜碱性。细胞的形态变化往往是一过性的,当病毒周期性地增殖几次以后,细胞外观可能恢复正常。但也有部分研究者报道他们看到了明显的细胞病变,而且病毒滴度高达1095。这可能与毒株、接毒浓度、细胞种类、营养液和接种时间等因素有关。如据Johnson资料(1967),有很多犊牛、猪、马、犬的血清中,含有对本病毒增殖和形成细胞病变的耐热性抑制物质,当细胞培养液中含有这种血清时,产毒量下降约千倍,细胞病变当然也会受到明显的影响。
4.病原性  本病毒不仅能引起猫、水貂明显的临床症状和很高的死亡率,而且能感染几乎所有的猫科动物。血清学调查结果表明,许多这类动物的血清中,含有抗本病毒的特异性抗体,表明在自然情况下病毒在这些动物间的广泛存在和传播。  猫泛白细胞减少症是一种主要侵害幼猫的高度接触性传染病。潜伏期2~9天,平均4天。本病的临床表现甚为多样,分为特急性型、急性型、亚急性型和不显型。特急性型不待发现临床症状即突然死亡,畜主往往怀疑为中毒。急性型可于24小时内死亡。亚急性型可持续数日到一周,呈双相热。第一期发热时病畜体温升高40℃左右,持续约一天,发热平息后数天第二次发热,体温40℃以上,同时出现厌食、呕吐、沉郁、出血性肠炎和脱水等症状,病猫多于5~6天死亡,死亡率一般为60%~70%。  在严重流行时幼猫几乎全部死亡。病程超过6天以上的猫,有可能经过较长时间的恢复期后痊愈。人工感染时,多种途径(经口、鼻、皮下、静脉、腹腔等)均能引起猫发病,尤其幼龄动物更为敏感。在体温开始升高前不久,出现短时间的白细胞增多。第二次发热后,白细胞严重减少,甚至在血液涂片标本上难以找到白细胞,故名猫泛白细胞减少症。正常猫血清中白细胞数为15000~20000个/mm3。白细胞数减少到8000个/mm3左右时,即可怀疑为本病,5000个/mm3以下时表示重症。2000个/mm3以下预后不良,以淋巴细胞和中性多核白细胞减少为主。  由于病毒对处于有丝分裂过程中的细胞有选择亲和性,所以大多数病变都发生在旺盛增殖的组织,如骨髓的干细胞、淋巴细胞生成组织和肠粘膜。病毒对新生猫小脑内旺盛增殖的生发细胞,具有选择亲和性,致使病猫发生共济失调。当感染发生于妊娠后期时,病毒能通过胎盘屏障,引起胎儿小脑发育不全、死亡和流产。  除特急性病猫外,剖检可见脱水和消瘦变化。空肠和回肠局部充血,脾肿大,肠系膜淋巴结水肿、坏死。多数病例长骨的红髓变为液状或半液状,此点具有一定的诊断价值。组织学检查时,于肠管上皮细胞可见嗜酸和嗜碱性两种包涵体,但病程超过3~4天以上者,往往消失。
5.生态学  在约一周的病毒血症期间,病畜的粪、尿和各种分泌液均含有病毒。被污染的食物、器具和衣服等均可引起疾病传播,以经口为主,也能经飞沫传染。康复猫的排毒期可持续数月到一年。除水平传播外,已确认妊娠猫能发生对胎儿的垂直传播。由于病畜发生病毒血症的时间长达5天以上,因此推测通过蚤类等吸血昆虫的传播也是可能的。
6.免疫康复动物血液内的中和抗体缓慢持续升高,猫通常在感染后8天开始出现中和抗体,15天时滴度达1∶16~1∶60,30天可达1∶150。实际观察表明,本病的免疫力是坚强持久的,因为在自然情况下,很少能看到遭受第二次感染的动物。新生幼猫可从初乳获得中和抗体,这种被动免疫可持续3~12周。  对欧、美地区猫群血清抗体的调查表明,阳性率可高达70%(滴度从1∶5算起)。但在自然情况下,并未见有这样多的猫发病,原因在于成年猫多为亚临床感染,虽不显症状,但产生免疫反应。  在疫苗方面,一般应用加有佐剂的细胞培养灭活疫苗。通常是在幼猫7~10周龄断奶后进行第1次注射,在12周龄时作第2次注射,必要时可在16周龄时再强化注射1次。以后每年接种1次。疫苗对猫效果好,可产生足够的免疫力,并持续8~12个月。六十年代后,开始出现弱毒疫苗,主要是通过猫或水貂肾的单层细胞培养连续传代减毒的。但这种疫苗有的不够安全,容易发生返祖现象。据认为1974年Simons通过雪貂细胞传代致弱的疫苗,对猫能产生良好的免疫力,一次弱毒免疫可持续终生有效。 
 [BT4]7.诊断  根据临床症状、病理组织学变化(骨髓呈液状、半液状,小肠粘膜上皮细胞核内的包涵体)和白细胞减少等,可作出初步诊断。确诊要靠病毒分离或免疫血清学试验。  (1)病毒的分离和鉴定  急性病例可采取血液和各种脏器或病畜的排泄物,作为分离病毒的病料。病死动物则以脾、小肠和胸腺最为适宜。  幼猫肾细胞最常用于病毒分离,原代和次代培养物均可。由于肾组织可能有潜伏带毒的危险,试验时必须设不接种病料的空白对照,并盲传1~3代。在种入细胞后数小时即接种病料,因为病毒最适于在有丝分裂过程中的细胞内增殖。据一些研究者的资料,直接采取患畜自体的肾、肺、睾丸等脏器作病毒分离,最易获得成功。由于细胞病变往往不明显,可于接种病料后第3、4、5、6、7天,对培养细胞作H.E.染色后镜检,观察有无核内包涵体。是否出现明显细胞病变,主要与接种病毒的浓度有关,浓度大于103TCID50时,方能出现轻微病变,大于104TCID50以上时,能出现明显的细胞病变。最快速的病毒鉴定方法是免疫荧光抗体直接着染病畜组织脏器的冰冻切片或着染分离病毒的细胞培养物。本病毒仅在4℃下凝集猪的红细胞,在感染细胞核内出现包涵体,尤其前者对病毒鉴定有一定参考价值。  人工感染试验时,除猫和水貂外,小鼠、豚鼠、家兔、仓鼠、犬、恒河猴、灰鼠等动物均不感染,但新生雪貂能感染发病。  应用已知标准毒株的免疫血清,在猫次代细胞培养物上进行中和试验,是最好的病毒鉴定方法。由于细胞病变不明显,以检出核内包涵体为判定指标。于倍倍稀释的免疫血清管内。加入等量的病毒悬液(100~300TCID50/0.1ml),混匀,放37℃感作2小时,然后以02ml接种细胞培养管(于原代细胞作次代培养后2~3小时,每个稀释度接种4管),每个细胞管补充维持液至总量1ml(每管都装有盖玻片),应用多孔培养板当然更为方便。放37℃培养4天,取出盖玻片,作包涵体染色后镜检判定。  血凝抑制试验尽管其敏感性不如血清中和试验,但方法简便,仍不失为一种理想的病毒鉴定和血清学诊断手段。只能用猴或猪的红细胞,操作方法与一般常规相同。  (2)病毒或病毒抗原的检出  取呈肠炎症状病猫的粪便,以差速和超速离心处理提取病毒后,作免疫电镜检查。或取上述粪便直接或适当稀释后,以3000r/min离心沉淀15分钟,吸取上清液,加入等量氯仿,振荡10分钟并如上离心沉淀后,取上清液直接进行负染后电镜检查,或加入免疫血清后作免疫电镜检查。取发病早期的病猫粪便进行血凝试验,常有较高血凝价。取肠粘膜和淋巴组织,经冰冻切片后作免疫荧光抗体检查,也可取得满意结果。  (3)特异性抗体的检出血清中和、血凝抑制和补体结合反应等都可作为抗体的特异性诊断法。病愈后血清的效价要比病初血清高4倍以上才有诊断意义。

 

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