犬腺病毒诊断与免疫
5.诊断特异性诊断主要依靠病毒分离和血清学诊断。病毒分离是用发病初期的血液、扁桃体棉拭子或死亡动物的肝、脾乳剂接种犬肾原代或继代细胞。根据毒株和接毒剂量的不同，细胞病变最早出现于接毒后30小时，但有时需待6～7天才能见到。随后即可应用补体结合试验检测细胞培养物中的腺病毒抗原。应用中和试验，更可进一步鉴定病毒的型。以人工感染动物的特异免疫血清作为抗体，应用这种抗体作补体结合试验，还可检出急性病犬肝脏以及血清和腹水中的病毒抗原。对于病死动物，可用琼脂扩散试验检出感染组织块(一般应用肝组织块)中的特异性沉淀原。通常是在中央孔内加入特异免疫血清，周围6孔中分别加入标准阳性抗原(上孔)和标准阴性抗原(下孔)以及被检肝组织块或乳剂。应用荧光抗体技术，可以直接检测组织切片、触片或感染细胞培养物中的病毒抗原。大剂量接种豚鼠，可以使其感染。鸡胚及其它常用实验动物不感染犬腺病毒。皮下、腹腔、静脉或经口均可使易感犬发生感染，但似乎经眼接种最为敏感。血清学诊断是用组织培养液做抗原进行补体结合试验，或用浓缩的感染细胞培养物为抗原作琼脂扩散试验，检测血清抗体。必要时，作中和试验和血凝抑制试验(用人的O型红细胞)。有人建议应用间隔14天的双份血清，以抗体效价提高4倍以上者作为现症感染的阳性指标。近年来，犬腺病毒分子生物学研究异常活跃，也为犬腺病毒1型和2型鉴别提供了分子生物学基础。在病毒的早期转录区选择适当的保守区域作为引物，利用多聚酶链反应(PCR)可以将两型明显分别开来，扩增产物的大小不同，犬腺病毒1型为520bp，犬腺病毒2型为1030bp。核酸探针的研究也有不少报道。上述两种方法尚未广泛推广应用。
6.免疫自然感染发病犬，免疫期长达5年之久。国内外已经推广和应用灭活疫苗和弱毒疫苗。最早使用的是犬腺病毒1型感染犬肝脏制备的脏器灭活苗，后来研制成功的是犬腺病毒1型细胞培养弱毒苗，因其可使部分免疫犬发生“蓝眼”，现已逐步为犬腺病毒2型弱毒疫苗所代替。这两种弱毒疫苗，免疫性、安全性都很好，接种后14天即可产生免疫力。由于该病常与犬瘟热等病毒性疾病并发，所以实际工作中，常将其与犬瘟热、副流感、细小病毒性肠炎等弱毒株制成不同的弱毒联合疫苗。试验与应用结果，均未发现弱毒之间有免疫干扰现象。鉴于犬腺病毒弱毒株具有良好的免疫原性与稳定的遗传性，包括E3区在内的基因背景已基本查清。国内外正进行以犬腺病毒弱毒株为载体的狂犬病病毒、肠炎病毒以及犬瘟热病毒基因重组疫苗的研究。紧急预防时，可应用高价免疫血清。
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