磺胺二甲嘧啶检测方法

1．分析目标化合物
    磺胺二甲嘧啶
2、仪器设备
    带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪。
3、试剂
    除下列试剂外，使用附录2所列试剂。
    氧化铝（中性）小柱（1850mg）：在内径8～9mm的聚乙烯管中填充1850mg柱色谱用氧化铝或填充具有相同分离特性的其他物质。
4．标准品
    磺胺二甲嘧啶：含磺胺二甲嘧啶99％以上，熔点为198℃～201℃。
5．试验溶液的制备
a：提取方法
① 肌肉、脂肪、肝脏和肾脏
    将样品搅碎混合均匀后，称取5.00g，加入25mL乙腈和10g无水硫酸钠，搅拌后，以每分钟3000转离心分离5分钟，乙腈层移入100mL分液漏斗中。加入25mL乙腈饱和正己烷，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中。离心分离管的残留物中加入25mL乙腈，激烈振荡1分钟后，按上述同样的条件离心分离，合并乙腈层于分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中，加入10mL正丙醇，40℃以下除去乙腈和正丙醇。残留物中加入3mL乙腈：水（19：1）混合溶液溶解。
② 奶
    称取10.0g样品，加入25mL乙腈和20g无水硫酸钠，以每分钟3000转离心分离5分钟，乙腈层移入100mL分液漏斗中。加入25mL乙腈饱和正己烷，用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中。离心分离管的残留物中加入25mL乙腈，激烈振荡1分钟，按上述同样的条件离心分离，合并乙腈层于分液漏斗中。用振荡器激烈振荡5分钟后，静置，乙腈层移入磨口减压浓缩器中，加入10mL正丙醇，40℃以下除去乙腈和正丙醇。残留物中加入3mL乙腈：水（19：1）混合溶液溶解。
b、净化方法
    在氧化铝（中性）小柱（1850mg）中注入10mL乙腈：水（19：1）混合溶液后，弃去流出液。柱中注入a 提取方法所得的溶液后，弃去流出液。注入10mL乙腈：水（17：3）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去乙腈和水。残留物中加入1.0mL乙腈：0.025 mol／L磷酸二氢钠溶液（3：17）混合溶液溶解，加入0.5mL乙腈饱和正己烷，以每分钟3000转离心分离5分钟，弃去正己烷层，收集乙腈和磷酸二氢钠溶液的混合溶液层，此为试验溶液。
6、操作方法。
a 定性试验
    按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。
    操作条件
    柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm）。
    柱：内径4.0～6.0mm、长150mm不锈钢管。
    柱温：40℃
    检测器：波长268nm。
    流动相：乙腈：0.025 mol／L磷酸二氢钠溶液（3：17）混合溶液。调整流速使磺胺二甲嘧啶约10分钟流出。
② 定量试验
    根据与a 定性试验相同的试验条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。
7．定量限
    肌肉、脂肪、肝脏和肾脏：0.01mg/kg；乳：0.005 mg/kg 。
8．注意事项
    在5 试验溶液的制备b净化方法中用的氧化铝（中性）小柱，预先用标准品确认其保持、溶出性能和净化效果、回收率（90%～100%）时，确证肌肉、脂肪、肝脏及肾脏的定量限0.01mg/kg以下，奶的定量限0.005mg/kg以下。