链霉素,二氢链霉素,壮观霉素和新霉素检测方法

1．分析目标化合物

二氢链霉素和链霉素 、壮观霉素、新霉素                        

                                                                           2．仪器设备

高效液相色谱—质谱仪。

 

3．试剂

七氟丁酸：七氟正丁酸

庚磺酸钠：1－庚磺酸钠（特级）

1％的偏磷酸溶液

甲醇

 

4．标准品

硫酸二氢链霉素: 本品1.000mg含720µg以上效价的二氢链霉素。

硫酸链霉素:本品1.000mg含718µg以上效价的链霉素。

硫酸新霉素: 本品1.000mg含680µg以上效价的新霉素。

盐酸壮观霉素：本品1.000mg含603µg以上效价的壮观霉素。

5．试验溶液的制备

a 提取方法

①肌肉、脂肪、肝脏和肾脏

肌肉：尽可能除去脂肪，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。

脂肪：尽可能除去肌肉，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。

肝脏和肾脏：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。

加入25mL 1％的偏磷酸溶液，搅拌3分钟后，以每分钟3000转离心分离10分钟，脱脂棉过滤。

②奶

称取5.00g样品，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，搅拌3分钟后，用振荡器激烈振荡5分钟，以每分钟3000转离心分离10分钟，脱脂棉过滤。

③蛋

除去蛋壳，充分均匀后，称取其5.00g，加入25mL 1％的偏磷酸溶液，搅拌均匀后，以每分钟3000转离心分离10分钟，脱脂棉过滤。

b、净化方法

在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(500mg)中，依次注入5mL甲醇和10mL水，舍去流出液。柱中依次注入a 提取方法所得到的溶液和5mL水，流出液中加入2mL 0.1mol／L庚磺酸钠。柱中再依次注入5ml甲醇和10mL水，舍去流出液。依次注入前面加入了庚磺酸钠的溶液和5mL水，舍去流出液。柱中注入10mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去甲醇。残留物中加入1.0mL乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液（1：9）混合溶液溶解，此为试验溶液。

6、操作方法。

a 定性试验

按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致。

操作条件

柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶。

柱：内径1.0～6.0mm、长10～150mm不锈钢管。

柱温：40℃

流动相：乙腈：0.005mol／L七氟丁酸溶液(1：9)混合溶液。调整流速使壮观霉素约10分钟流出。

b 定量试验

根据与a 定性试验相同的试验条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。

7．定量限

二氢链霉素：0.02 mg/kg

链霉素：    0.02 mg/kg

壮观霉素：  0.02 mg/kg

新霉素：    0.02 mg/kg

8．注意事項

（1）试验溶液的制备

净化方法采用的十八烷基甲硅烷化硅胶小柱，应预先采用标准品在保证确定的保持、溶出性能和净化效果时，确证二氢链霉素定量限在0.02mg/kg以下；链霉素定量限在0.02mg/kg以下；壮观霉素定量限在0.02mg/kg以下；新霉素定量限在0.02mg/kg以下。另外，用标准品进行添加回收试验，确证十八烷基甲硅烷化硅胶小柱的净化效果和回收率（90～100％）。

（2）标准溶液的制备

① 将相当于二氢链霉素10.0mg（效价）的标准品溶解在水中，作为二氢链霉素的标准原液（二氢链霉素100mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。

②将相当于链霉素10.0mg（效价）的标准品溶解在水中，作为链霉素的标准原液（链霉素100mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。

③将相当于壮观霉素10.0mg（效价）的标准品溶解在水中，作为壮观霉素的标准原液（壮观霉素100mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。

④将相当于新霉素10.0mg（效价）的标准品溶解在水中，作为新霉素的标准原液（新霉素100mg（效价）/L）。该标准原液保存在-20℃，6个月内稳定。

⑤ 用甲醇递减稀释二氢链霉素、链霉素、壮观霉素和新霉素各标准原液，作为制作标准曲线的标准溶液。