生化分析中植物样品的采取、处理与保存

在生物化学分析中样品的采取是否有最佳的代表性影响着试验结果的准确性。如果不遵循科学方法采样，样品缺乏代表性，即使分析工作严谨无误，也得不到正确的结论。因此，必须对样品的采取、处理和保存给予足够的重视。
    采回的样品，一般数量较大，称为“原始样品”。再按原始样品的种类（如根、茎、叶、花、果实等）分别选出“平均样品”。再根据分析任务的要求和样品的特征，从平均样品中选出供分析用的“分析样品”。由此可见，分析样品的获得须经一系列复杂而仔细的步骤。

（一）原始样品及平均样品的采取、处理与保存
原始样品及平均样品的采取，按分析目的可有两种方法：一种是为了鉴定品质而进行的混合取样；另一种是按植物生育期取样。
   1．混合取样法：一般种子样品可用混合取样法。把代表一定面积的收获物先经脱粒，然后在木板或牛皮纸上铺成均匀的一层，再按对角线把样品分成4 个三角形，取两个相对的三角形的样品，而将另外两个三角形的样品淘汰。如此操作，一直淘汰至所要求的数量为止。这个取样法叫做“四分法”，这样取得的平均样品在实验室经适当处理即可制成分析样品。
     豆类及油料种子选取平均样品的方法与谷类种子取样法相同。注意，样品中不要有未成熟的种子或混杂物，不要将簸出去的种子加到平均样品中。
     如果直接从田里采取植株样品，在生长均一的情况下，可按对角线或沿平行的直线等距离采样。如果植株长势不均匀，则应根据生长的强弱，按比例采取大约5 个点的样品后混合。每个样点取的植株数随植物的种类和采样的时间有所不同。如小麦等密植型作物或其它作物幼苗，可按面积采取或采取样品束（一束样品的植株数视需要而定），象玉米、甘蔗等作物，每个样点采取一株就够了。
     选取甘薯、马铃薯、甜菜、萝卜等块根、块茎的平均样品时，必须注意到大、中、小三类样品的比例。然后纵切取其一部分（二分之一至四分之一）组织作为平均样品，否则就不具有代表性。
     一般蔬菜样品也按对角线法采取。番茄样品应选择簇位相同、成熟程度一致的果实，取果实的1/4 组成平均样品。
     采取苹果、梨、桃、柑橘等水果的平均样品时，一般选1～3 株果树为代表，从植株的全部收获物中选取大、中、小果实以及向阳、背阳部分的果实混合成平均样品。葡萄等浆果，采样时可在不同地点的5～10 株植物上的各个部位包括向阳、背阳以及上、下各部位采样。
2．按生育期取样法：在幼苗期取样，因植株较小，采取的株数就比较多，尽管各种作物有所不同，总的原则是所取样品的干重应当是分析用的2 倍。
     植株逐渐长大，每次采取的株数也相应减少，但绝不能采单株作样品。在各个生育期取样时，都应作观察记录。
     取样地点一般在边行区，取样点的四周不应有缺株现象。
     取样后，按分析目的分成各个部分，如根、茎、叶、穗等，然后捆好，附上标签，分别装入样品袋。
     瓜果、蔬菜取回后因水分较多，容易霉烂，可在冰箱中冷藏，或用于干燥灭菌，或用酒精处理或烘干，以供分析之用。
（二）分析样品的处理与保存
    采回的新鲜植株样品如果混有泥土，不应用水冲洗，可用湿布擦净，然后置空气流通处风干或烘干。烘干样品时，可把植株放入80℃烘箱中，以停止酶活动并驱除水分。烘干样品时，注意温度不能过高，以免把植株烤焦。最好不要晒，以免灰尘沾染或被风刮走。
全植株样品应按照根、茎、叶、种子等分开。果实必须剖出时，要用锋利的不锈钢刀子，不允许将其中汁液流失。
    为了避免糖、蛋白质、维生素等成分的损失，可采用真空干燥或冷冻真空干燥法。风干或烘干的样品，根据其特点分别进行以下处理：
   1．种子样品的处理：一般谷物种子的平均样品可用电动样品粉碎机粉碎。事先要把机器内收拾干净，最初粉碎出的少量样品可弃去不用，然后正式粉碎，使全部样品通过一定筛孔的筛子，混合均匀，按四分法取出一定数量的样品细粉作为分析样品，贮存于干燥的磨口广口瓶中，同时贴上标签，注明样品的名称、编号、采取地点、处理、采样日期和采样人姓名等。长期保存时，标签应涂石蜡，并在样品中加适当的防腐剂。
蓖麻、芝麻等油料种子应取少量样品在研钵内研碎，以免脂类损失。
   2．茎秆样品的处理：干燥后的茎秆样品也要磨碎。粉碎茎秆的粉碎机不同于种子粉碎机，其切割部分由几付排列方向相反的刀片组成。粉碎后的样品按上法保存。
   3．多汁样品的处理：一般多汁样品，如瓜果蔬菜等，其化学成分（糖、蛋白质、维
生素等）在保存中易发生变化，往往多用新鲜样品进行各项测定。将它们的平均样品切成小块，放入电动组织捣碎机中打成匀浆，如果样品含水量较少，可按样品重量加入适量水，然后捣碎。样品量少时可用手持匀浆器或在研钵内研磨，必要时可在研钵内加少量石英砂。
如果所测物质不稳定（如某些维生素和酶等），则上述操作均应在低温下进行。样品匀浆如来不及测定，可暂存冰箱内，或灭菌后密封保存。
   4．丙酮干粉的制备：在分离、提纯或测定某种酶的活力时，丙酮干粉法是常用的有效方法之一。该种方法是将新鲜材料打成匀浆，放入布氏漏斗，按匀浆重量缓慢加入10倍的低温冰箱内冷却到－15℃～－20℃的丙酮，迅速抽气过滤，再用5 倍冷丙酮洗3 次，在室温下放置1 小时左右至无丙酮气味，然后移到盛有五氧化二磷的真空干燥器内干燥。丙酮干粉的制备在低温下完成，所提丙酮干粉可长期保存于低温冰箱。用这种方法能有效地抽提出细胞中的物质，还能除掉脂类物质，免除脂类干扰，而且使得某些原先难溶的酶变得溶解于水。