实验室最危险的物质（二）

2.EB（Ethidium bromide，溴化乙锭）
溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302 nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254 nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302 nm和366 nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590 nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20～30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5 μg/mL）时，可以检测到少至10 ng的DNA条带。溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性！会在60～70℃时蒸发（所以最好不要在胶太热的时候加，或者应该加到液体里，0.5 μg/mL，染色半小时）（当EB加得过多时，也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡20 min以降低未结合的EB引起的背景荧光）。
溴化乙锭溶液的净化处理：由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。
（1）对于EB含量大于0.5mg/mL的溶液，可如下处理：
①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5 mg/mL；
②加入一倍体积的0.5 mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的2.5 mol/L HCl，混匀，置室温数小时；
③加入一倍体积的2.5 mol/L NaOH，混匀并废弃。
（2）EB含量小于0.5 mg/mL的溶液可如下处理：
① 按1 mg/mL的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时；
② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

3.DEPC
DEPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可灭活各种蛋白质，是RNA酶的强抑制剂。DEPC是一种潜在的致癌物质，在操作中应尽量在通风的条件下进行，并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩。不小心粘到手上注意立即冲洗，RNase Away TM试剂可以替代DEPC，操作简单，价格低，且无毒性。只需将RNase Away TM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面，浸泡后用水冲洗去除，即可以快速去除器皿表面的RNase，并且不会残留而干扰后继实验。

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