细菌检验工作的基本技术——嗜血杆菌属

    1．与相关菌属、种的鉴别：嗜血杆菌属常与放线菌属、艾肯菌属、心杆菌属、金氏菌属相鉴别，见下表。

表                 嗜血杆菌属菌种与相关菌种鉴别试验

 

2．属内鉴别可利用分离培养时，对X、 V因子的需要和溶血性可初步区别不同的嗜血杆菌种。

    进一步的鉴别可通过生化试验来确定到种。流感嗜血杆菌发酵木糖，与埃及嗜血杆菌木糖不发酵相区别。杜克雷嗜血杆菌有特殊临床来源，所以较易诊断。属内种的鉴别见下表。

表                         嗜血杆菌属中种的特征

注：a．包括埃及嗜血杆菌；D．不同结果；w．弱发酵反应

       b．ONPG，O-硝基酚-β-D半乳糖吡喃苷。

   

(1) 流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的鉴定。

    用金黄色葡萄球菌作“卫星”试验阳性。但应注意“副流感”只需V因子即生长。可同时用M—H平板作卫星试验，能在M—H平板呈卫星生长的菌可否定流感嗜血杆菌。二者也可用糖发酵试验加以鉴别。

    (2) 作为院内感染病源追踪的流行病学的需要，对流感、副流感嗜血杆菌须鉴定到型。可用吲哚、尿素、鸟氨酸3个试验将“流感嗜血杆菌”分为8个生物型(详见表)，或用血清学进行分型。

表                 流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌生物型鉴别

 注：a．埃及嗜血杆菌与流感嗜血杆菌Ⅲ生物型主要生化特性相似，二者区别参考有关资料。

1．  卫星试验：挑取可疑菌落密涂划种于血平板上或M—H平板上，再将金黄色葡萄球菌点种或划种其上，35℃24h孵育。如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长，即“卫星”试验阳性。在血平皿上划上葡萄球菌时，X，V因子都具备，在M-P,平板上接种葡萄球菌、只具备V因子。

2．  糖发酵试验

   培养基：1％糖的酚红肉汤，并补充所需生长因子，方法参考奈瑟菌鉴定。

3．  吲哚(快速法)试验：在pH 6.8的磷酸缓冲液(0.05mol)中，加0.1％的L-色氨酸。大量接种被检菌，孵育4h后，加Kovacs试剂。

4．  尿素酶试验

   培养基：

      KH₂PO₄                        0.1g

K₂HPO₄                        0.1％

NaCl                            0.5g

0.2％酚红水溶液       0.5ml

蒸馏水                      100ml