细菌检验工作的基本技术——肠杆菌科（上）

肠杆菌科

 

一、常规鉴定

肠杆菌科虽然有100多个种，在临床常见的不过是其中的一部分，约20余种。从临床标本中分离的频率较高的是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌。对3个菌种的鉴别鉴定，实验室可用常规的方法，一般不困难。其他菌种应按规程的操作从属到种的步骤进行。

    (一)与其他科属细菌的鉴别

    革兰阴性杆菌除了肠杆菌科外，还有弧菌科和非发酵菌。所以，肠杆菌科的鉴定首先应注意与这些菌的鉴别。可用形态、葡萄糖氧化或发酵、氧化酶、鞭毛等特性加以区别，见表。

表      肠杆菌科与其他科菌的区别

注：*，不动杆菌、嗜麦芽黄单胞菌除外。

 

(二)肠杆菌科的初步分群

    可用两个试验将肠杆菌科初步分为二大类，即苯丙氨酸脱氨酶试验和葡萄糖酸盐试验(也可用V-P试验)，见表:

表       肠杆菌科初步分类

注：·有例外。

 

(三)苯丙氨酸阳性菌属及种的鉴别

苯丙氨酸阳性、葡萄糖酸盐阴性的有变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属。

1．各属的鉴别：变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属的区别可用H₂S、鸟氨酸、枸椽酸盐三个试验，其鉴别见表:

表                   苯丙氨酸阳性的各属鉴别

 

    2．变形杆菌属种的鉴别：变形杆菌属常见有三个种即普通变形杆菌、奇异变形杆菌、潘尼变形杆菌。产粘液变形杆菌仅从活的或死的吉普赛蛾幼虫中发现，与人类的关系未见报道。鉴别见表。

表                      变形杆菌属内种的鉴别

 

    3．普罗威登斯菌属种的鉴别：该属临床常见有3个菌种，即产碱普罗威登斯菌、斯图普罗威登斯菌、雷极普罗威登斯菌，其鉴别见表:

    表                       普罗威登斯菌属内种的鉴别

 

    4．摩根菌属的鉴定：摩根菌属常见1个种，即摩根摩根菌，其鉴定见”苯丙氨酸阳性的各属鉴别表”。

 

(四)苯丙氨酸阴性、葡萄糖酸盐阳性各属及种鉴别

    1．葡萄糖酸盐阳性各属的鉴别：这类细菌有克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属。可用动力、山梨醇、DNase、棉子糖等试验将其区别(见表)。

表5-3-28   葡萄糖酸盐阳性的各属的鉴别

注：a．鼻硬结亚种、臭鼻亚种的某些菌株阴性。

       b．聚团肠杆菌阴性。

       c．芳香沙雷菌生物2群、普城沙雷菌、深红沙雷菌阴性。

       d．解吗氨酸克雷伯菌阳性。

 

2．克雷伯菌属种的鉴别：克雷伯菌属有肺炎克雷伯菌(亚种)、臭鼻亚种、鼻硬结亚种、产酸克雷伯菌。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌是临床中分离较多的，二者的区别在靛基质。另外，两个亚种虽然临床不多见，但已从臭鼻患者、呼吸道慢性病患者以及鼻硬结患者中分离到，因此，鉴别它们也是有一定的临床意义。可用甲基红、赖氨酸、丙二酸盐鉴别(见表5—3—29)。

表5-3-29   克雷伯菌属种的鉴别

 

    3．肠杆菌属种的鉴别：肠杆菌属常见有 5个菌种：阴沟肠杆菌、坂崎肠杆菌、聚团肠杆菌、产气肠杆菌、格高菲肠杆菌。在其鉴别上，氨基酸脱羧酶试验的价值较大。坂崎肠杆菌、聚团肠杆菌可产生黄色素，为鉴定提供了较为明显的特征。聚团肠杆菌还有一个特点，就是赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸皆为阴性。坂崎肠杆菌与阴沟肠杆菌的区别在于山梨醇，坂崎肠杆菌为阴性，阴沟肠杆菌为阳性。格高菲肠杆菌与产气肠杆菌也很相似，可用尿素酶和山梨醇相区别。前者尿素酶阳性，山梨醇阴性；后者尿素酶阴性，山梨醇阳性。5个种的鉴别详见表。

表5-3-30     肠杆菌属种的鉴别

试  验	阴沟肠杆菌	坂崎肠杆菌	聚团肠杆菌	产气肠杆菌	格高菲肠杆菌
赖氨酸	-	-	-	+	+
鸟氨酸	+	+	-	+	+
精氨酸	+	+	-	-	-
山梨醇	+	-	-/+	+	-
尿素酶	+/-	-	-/+	-	+
黄色素	-	+	+	-	-

 

4．沙雷菌属种与哈夫尼亚菌属种的鉴别：沙雷菌属有8个种，但临床只有粘质沙雷菌相对较多见，可用阿拉伯糖、木糖与其他沙雷菌相鉴别(见表)

表    粘质、液化沙雷菌的鉴别

 

哈夫尼亚菌属只有1个种，即蜂房哈夫尼亚菌，其特点是不分解乳糖(偶也有分解的，约5％)，发酵葡萄糖产气，动力“+”，靛基质“一”，V—P“+”，枸橼酸盐“+”，H：S“一”，赖氨酸“十”，鸟氨酸“十”，山梨醇“一”，棉子糖“一”。该菌种的生化反应在25℃比较稳定，与其他菌属的区别见前表5—3—22。

 

    (五)苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性的各属及种的鉴别

    1．这一类菌属有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、爱德华菌属、耶尔森菌属。他们的区别可用H₂S、动力、枸橼酸盐、靛基质、赖氨酸、尿素6个试验相鉴别(见表5—3—32)。

表5-3-32    苯丙氨酸、葡萄糖酸阴性各属的鉴别

注：·30℃以下培养有动力。

2．枸橼酸杆菌属种的鉴别：该属常见有弗劳地枸橼酸杆菌、异型枸橼酸杆菌、丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌等。三者的鉴别用靛基质、 H₂S、侧金盏花醇(见表5-3-33)。

表5-3-33     枸橼酸杆菌属种的鉴别

试  验	弗劳地枸橼酸杆菌	异型枸橼酸杆菌	丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌
H2S	+/-	-	-
靛基质	-	+	-
侧金盏花醇	-	+	-
丙二酸盐	-/+	+	-
KCN生长	+	-	+

3. 爱德华菌属，虽有3个种，但只有迟缓爱德华菌具有临床意义。其特点是不分解乳糖，分解葡萄糖产气，产生H₂S，动力“+”，靛基质“+”，V-P“-”，枸橼酸盐“-”，赖氨酸“+”，鸟氨酸“+”，其他糖和醇皆“-”。与其他菌属的区别见表5—3—22。

    4．埃希菌属从临床标本中常分离的是大肠埃希菌，靛基质“+”，甲基红“+”，枸橼酸“-”，但某些菌株动力“-”，迟缓发酵或禾发酵乳糖。不产气的菌株与志贺菌属的区别见表5—3—34。出血性腹泻的大肠埃希菌，其中最常见的为Ο157：H7型，研究也较清楚。该菌种对山梨醇不分解(35℃24～48h)。最后用血清学诊断方法确定。

表5-3-34            埃希菌种与其他菌种的鉴别

注：-，0～10％阳性；[-]，11％～25％阳性；d，26％～75％阳性；[+]，76％～89％阳性； +，90％～100％阳性；[-Y]，11％～25％产黄色素。

 

5．志贺菌属的鉴定：志贺菌属有4个种，临床上一般用抗血清鉴定血清群、型。在用诊断血清鉴定之前，必须确定属。有些大肠埃希菌生化特性不活泼，易与志贺菌混淆，根据表5—3—34所列的生化学特性鉴别。

4种志贺菌血清分群方法见有关产品说明。

6．沙门菌的鉴定：根据Bergey’s鉴定细菌学手册第九版(1994年)登载，沙门菌属分邦戈尔沙门菌(Salmonella bongori)和猪霍乱沙门菌(S．cho1eraesuis)。所有沙门菌属 (包括亚利桑那菌)血清型皆属上述二个种。邦戈尔沙门菌不到10个血清型，极其少见，而猪霍乱沙门菌有2 500以上血清型。

猪霍乱沙门菌再分6个亚种：亚利桑那亚种(subsp．arizonae)，猪霍乱亚种(subsp.  choleraesuis)，双相亚利桑那亚种(subsp.diarizonae)，豪顿亚种(subsp. houtenae)，印第卡亚种(subsp. indica)，和萨拉姆亚种(subsp．salamae)。属于猪霍乱沙门菌猪霍乱亚种的血清型皆已被命名，而其他亚种血清型没有命名。其鉴别见表5—3—35。沙门菌的鉴定以抗血清凝集方法最方便。在凝集前必须确定属。与本菌相似的有枸橼酸杆菌和爱德华菌，可利用赖氨酸、靛基质、枸橼酸盐等试验进行区别。鉴别方法参见表5-3-32。

    表5-3-35          沙门菌种、亚种、血清型的鉴别

注：-，0～10％；[-]，11％～25％阳性；d，26％～75％阳性；[+]，76％～89％阳性；+，90％～100％阳性。

 

沙门菌分型血清种类较多，依血清可将沙门菌分成2500个血清型。具体做法参见有关说明。

7．耶尔森菌的鉴定：耶尔森菌属中只有小肠结肠炎耶尔森菌较为常见。该菌与其他相应的菌属鉴定要点有二：①尿素酶阳性；② 37℃动力阴性，300℃以下培养动力阳‘哇。借此可以与其他的肠杆菌科细菌相区别。小肠结肠炎耶尔森菌的其他特性见表5-3-22。