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抗生素残留检查法


录入时间:2010-7-29 9:44:08 来源:中国药典2010版第三部

附录IX  A    抗生素残留检查法
(培养法
      本法系依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用,比较对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小,检查供试品中氨苄西林或四环素残留量。
     磷酸盐缓冲液(pH6.0)的制备  称取磷酸二氢钾8.0g、磷酸氢二钾2.0g,加水溶解并稀释至1000ml,经121℃灭菌30分钟。
     抗生素Ⅱ号培养基的制备  称取胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g,加入适量水溶解后,加入琼脂13~14g,加热使之溶胀,滤过除去不溶物,加入葡萄糖1g,溶解后加水至1000ml,调pH值使灭菌后为6.5~6.6;分装于玻璃管或锥形瓶中,经115℃灭菌30分钟,4℃保存。
     对照品溶液的制备  取氨苄西林对照品适量,用0.01mol/L盐酸溶解并稀释成每1ml中含氨苄西林10mg的溶液,精密量取适量,用磷酸盐缓冲液稀释成每1ml中含1.0μg的溶液。
取四环素对照品适量,用生理氯化钠溶液溶解并稀释成每1ml中含0.125μg的溶液。
      菌悬液的制备  (1)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)悬液   用于检测氨苄西林。取金黄色葡萄球菌(CMCC 26003)营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,35~37℃培养20~22小时。临时用,灭菌水或0.9%无菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
       (2)藤黄微球菌(Microccus luteus)悬液    用于检测四环素。取藤黄微球菌[CMCC (B)28001]营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,置26~27℃培养24小时。临用时,用0.9%无菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。
       检查法   取直径8cm或10cm的培养皿,注入融化的抗生素Ⅱ号培养基15~20ml,使在碟底内均匀摊布,放置水平台上使凝固,作为底层。取抗生素Ⅱ号培养基10~15ml置于50℃水浴预热的试管中,加入0.5%~1.5%(ml/ml)的菌悬液300μl混匀,取适量注入已铺制底层的培养皿中,放置水平台上,冷却后,在每个培养皿上等距离均匀放置钢管(内径6~8mm、壁厚1~2mm、管高10~15mm的不锈钢管,表面应光滑平整),于钢管中依次滴加供试品溶液、阴性对照溶液(磷酸盐缓冲液)及对照品溶液。培养皿置37℃培养18~22小时。
        结果判定  对照品溶液由抑菌圈,阴性对照溶液无抑菌圈。供试品溶液抑菌圈的直径小于对照品溶液抑菌圈的直径时判为阴性;否则判为阳性。
         【附注】本试验应在无菌条件下进行,使用的玻璃仪器、钢管等应无菌。

 

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