细菌生化反应培养基

1.    糖、醇发酵培养基

（1）成分

基础液

蛋白胨                   10ml

氯化钠                 5g

0.5%酸性品红指示液     10ml （或0.4％溴麝香草酚蓝指示液）( 6 ml )

水                     1000ml

糖、醇类  每100ml 基础液内各加0.5g

（2）制法 
      取蛋白胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3±0.1，加入指示液混匀。每100ml 分别加人l 种糖、醇或糖苷，混匀后分装于小管中（若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116 ℃ 灭菌15 分钟。
    常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二搪、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。
（3）用途 
      鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色（加酸性品红者由无色至红色或再至黄色；加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色）；产气时，小倒管内有小气泡。
2 ．七叶苷培养基
（1）成分

蛋白胨           5g

七叶苷           3g

磷酸氢二钾       1g

水               1000ml

枸橼酸铁         0.5g
( 2 )制法 
      除七叶苷外，取上述成分混合，微温使溶解，加入七叶苷混匀，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1，分装于试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。
3 ．磷酸盐葡萄糖胨水培养基
( 1 ）成分

蛋白胨          7g

葡萄糖          5g

磷酸氢二钾      3.8g

水              1000ml
( 2 )制法   取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌的甲基红试验（M-R 反应）和乙酰甲基甲醇试验（V-P 反应）。
     1甲基红试验（M-R 反应）取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35 ℃ 培养2 ～ 5 天，于培养管内加人甲基红指示液（称取甲基红0.1g，加95 ％乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml）数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。

2乙酰甲基甲醇生成试验（V-P 反应）   取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35 ℃ 培养48 小时，量取2ml 培养液，加入α-萘酚乙醇试液（称取α－萘酚5g ，加无水乙醇溶解使成100ml ) 1ml , 混匀，再加40％氢氧化钾溶液0.4ml ，充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35 ℃ 水浴4 小时后再观察。
4 ．蛋白胨水培养基
( l )成分

蛋白胨        10g

水             l000ml

氯化钠         5g
( 2 )制法  取上述成分混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。

① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35 ℃ 培养24～48 小时，必要时培养4～5 天，沿管壁加人靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
        ② 靛基质试液   称取对二甲氨基苯甲醛5g ，加入戊醇（或异戊醇）75ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml 徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深．或称取对二甲氨基苯甲醛1g ，加人95 ％乙醇95ml ，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml 徐徐滴入。
5 ．三糖铁琼脂培养基
( l ）成分

蛋白胨              20g

硫酸亚铁            0.2g

牛肉浸出粉          5g

硫代硫酸钠          0.2g

乳糖                10g

002％酚磺酞指示液   12.5ml

蔗糖                10g

琼脂                12～15g

葡萄糖              1g

水                  1000ml

氯化钠              5g

 ( 2 )制法   除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2 ～3cm ) 短斜面。
( 3 )用途  用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。

方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
6.克氏双糖铁琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨              20g

枸橼酸铁            0.3g

牛肉浸粉            3g

硫代硫酸钠          0.3g

酵母浸粉            3g

002 ％酚磺酞指示液  12 .5ml

乳糖                10g

琼脂                12～15g

葡萄糖              1g

水                  1000ml

氯化钠               5g
( 2 )制法   除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 , 加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成高底层（2～ 3cm ）短斜面。
( 3 )用途  用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。

方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养24～ 48 小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性，斜面层呈红色为乳糖发酵阴性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
7.脲（尿素）培养基
( 1 )成分

蛋白胨                   1g

 0.2 ％酚红溶液          6ml

葡萄糖                   1g

20%无菌脲溶液            l00ml

氯化钠                   5g

水                       1000ml

磷酸氢二钾               2g
( 2 )制法  除脲溶液外，取上述成分，混合，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，混匀后，121 ℃ 灭菌15 分钟，冷至50 ～ 55 ℃ ，加人无菌脲溶液（经膜除菌过滤），混匀，分装于灭菌试管中。
( 3 )用途   用于鉴别细菌的尿素酶反应。

方法和结果观察：取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内，置35 ℃ 培养24 小时，观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性；不变色为阴性，阴性者需延长观察至1 周。
8 ．苯丙氨酸琼脂培养基
( 1 )成分

磷酸氢二钠                            1g

氯化钠                                5g

酵母浸膏                              3g

琼脂                                  12 ～ 15g

DL-苯丙氨酸（DL -  phenylalanine )      2g （或L-苯丙氨酸）( 1g )

水                                    1000ml 
( 2 )制法   除琼脂外，取各成分溶于水，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，再加入琼脂，加热溶胀，分装试管，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成长斜面。
( 3 )用途用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验（也称苯丙酮酸试验）。

方法和结果观察：取斜面培养物，大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面，置35℃培养4 小时或18～ 24 小时，取4～ 5 滴10 ％三氯化铁溶液试剂，由斜面上部流下，若出现墨绿色，即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性；倘若不变色则为阴性。
9.氨基酸脱羧酶试验培养基
( 1 ）成分

①    基础液

蛋白胨                      5g

1.6    ％溴甲酚紫指示液        lml

酵母浸出粉                  3g

水                          1000ml

葡萄糖                      1g

② 氨基酸

L－赖氨酸                    0.5g （需加碱溶液溶解）

L-鸟氨酸                     0.5g（需加碱溶液溶解）

L-精氨酸                     0.5g（不需加碱溶液溶解）

( 2 )制法  先配制基础液备用；将溶解后的3 种氨基酸，各分别加至100ml 基础液（使氨基酸的终浓度为0.5 % ) ，混匀，调pH 值使灭菌后为6.8 。分装于小试管中，每管2.5ml 并滴加1 层液体石蜡；同时分装一部分基础液于小试管，作为对照培养基，均置116 ℃ 灭菌10 分钟。
( 3 )用途  用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。
     方法和结果观察：取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3 种培养基及基础液对照培养基，置35 ℃ 培养24 ～ 48 小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸，试验培养基和对照培养基应呈黄色，继续培养时，试验培养基如呈紫色或紫红色，即为阳性反应；如至培养末期，培养基仍同对照管呈黄色，则判为阴性反应。
10.明胶培养基
( l )成分

蛋白胨         5g

明胶           120g

牛肉浸出粉     3g

水             1000ml
( 2 )制法   取上述成分加人水中，浸泡约20 分钟，加热溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于细菌的明胶液化试验。

方法和结果观察：取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内，置35 ℃ 培养24 小时，取出置冰箱内10～  20 分钟。如培养基仍呈溶液状，则为阳性； 培养基重新凝固，则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢，如未见液化，需继续培养1 ～ 2 周方可确定阴性。
11 ．丙二酸钠培养基
( 1 )成分

酵母浸出粉                1g

磷酸二氢钾                0.4g

氯化钠                    2g

丙二酸钠                  3g

葡萄糖                    0.25g

0.4 ％溴麝香草酚蓝指示液  6ml

硫酸铵                    2g

水                        l000ml

磷酸氢二钾                0.6g
( 2 ) 制法   除指示液外,将上述成分溶解，调pH 值使灭菌后为6.8 ，再加入指示液。分装小管中．121 ℃ 灭菌15分钟。
( 3 )用途  用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。
     方法和结果观察：取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内，置35 ℃ 培养48 小时．于24 小时和48 小时后各观察1 次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应；无颜色变化，或由绿色变成黄色，则为阴性反应。
12 .枸橼酸盐培养基
( 1 )成分

氯化钠                     5g

枸橼酸钠（无水）           2g

硫酸镁                     0.2g

1.0 ％溴麝香草酚蓝指示液   10ml

磷酸氢二钾                 1g

琼脂                       14g

磷酸二氢铵                 1g

水                          l000ml
( 2 )制法  除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为6.9 士0.1 ，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟，制成斜面．
（3 ）用途  用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。
    方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48 ～ 72 小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7 天。
13．硝酸盐胨水培养基
（1）成分

蛋白胨        10g

硝酸钾        2 g

酵母浸出粉    3g

水            1000ml
( 2 )制法  取上述成分，加热溶解，调pH 值使灭菌后为7.3 士0.1 ，分装于小试管中，121 ℃ 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。
    方法和结果观察：取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置35 ℃ 培养24 小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合，每个培养物加混合物0.1 ml，产生红色为阳性反应，不产生红色为阴性反应。

甲液：称取α－萘胺5g，溶解于5mol / L 醋酸l000ml 中。

乙液：称取磺胺酸（对氨基苯磺酸）8g ，溶解于5mol / L 醋酸1000ml 中。
14 ．石蕊牛奶培养基
( l )成分

脱脂奶粉       10g

水             100ml

10 ％石蕊溶液  0.65ml
( 2 )制法   取上述成分混匀后，分装于小试管中．116 ℃ 灭菌10 分钟，
( 3 )用途   用于检查细菌对牛奶的凝固和发酵作用。
15.半固体营养琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨        10g

琼脂          4g

牛肉浸出粉    3g

水            l000ml

氯化钠        5g
( 2 )制法除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH 值使灭菌后为7.2 士0.2 ，再加入琼脂，加热溶胀，分装于小管中，121 ℃ 灭菌15 分钟后，直立放置。待凝固后备用
( 3 )用途  用于观察细菌的动力，也可用于一般菌种的保存。

细菌动力检查：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置35 ℃ 培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长．为动力阳性；否则为阴性。阴性者，应再继续培养观察2 ～ 3 天。 

上一篇：微生态活菌总论（下）

下一篇：药品微生物检验替代方法验证指导原则