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细菌生化反应培养基


录入时间:2010-7-29 10:18:33 来源:中国药典

     下列各类培养基常用于测定细菌的糖类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、碳源和氮源利用试验等生化反应。

1.    糖、醇发酵培养基

(1)成分

基础液

蛋白胨                   10ml

氯化钠                 5g

0.5%酸性品红指示液     10ml (或0.4%溴麝香草酚蓝指示液)( 6 ml )

水                     1000ml

糖、醇类  100ml 基础液内各加0.5g

(2)制法 
      
取蛋白胨和氯化钠加入水中,微温使溶解,调pH 值使灭菌后为7.3±0.1,加入指示液混匀。每100ml 分别加人l 种糖、醇或糖苷,混匀后分装于小管中(若需观察产气反应,在小管内另放置杜汉小倒管)。于116 灭菌15 分钟。
    
常用的糖、醇或糖苷:阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二搪、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。
(3)用途 
     
鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应,发酵者产酸,培养基变色(加酸性品红者由无色至红色或再至黄色;加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色);产气时,小倒管内有小气泡。
2 .七叶苷培养基
(1)
成分

蛋白胨           5g

七叶苷           3g

磷酸氢二钾       1g

水               1000ml

枸橼酸铁         0.5g
( 2 )制法 
      除七叶苷外,取上述成分混合,微温使溶解,加入七叶苷混匀,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1,分装于试管中,121 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验,产生棕黑色沉淀为阳性反应。
3 .磷酸盐葡萄糖胨水培养基
( 1 )成分

蛋白胨          7g

葡萄糖          5g

磷酸氢二钾      3.8g

水              1000ml
( 2 )制法   取上述成分混合,微温使溶解,调pH值使灭菌后为7.3 0.1 ,分装于小试管中,121 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌的甲基红试验(M-R 反应)和乙酰甲基甲醇试验(V-P 反应)。
    
1甲基红试验(M-R 反应)取可疑菌落或斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,置35 培养2 5 天,于培养管内加人甲基红指示液(称取甲基红0.1g,加95 %乙醇300ml,使溶解后,加水至500ml)数滴,立即观察,呈鲜红色或橘红色为阳性,呈黄色为阴性。

2乙酰甲基甲醇生成试验(V-P 反应)   取可疑菌落或斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,置35 培养48 小时,量取2ml 培养液,加入α-萘酚乙醇试液(称取α-萘酚5g ,加无水乙醇溶解使成100ml ) 1ml , 混匀,再加40%氢氧化钾溶液0.4ml ,充分振摇,立刻或数分钟内出现红色,即为阳性反应;无红色反应为阴性,如为阴性反应,置35 水浴4 小时后再观察。
4 .蛋白胨水培养基
( l )成分

蛋白胨        10g

水             l000ml

氯化钠         5g
( 2 )制法  取上述成分混合,微温使溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1 ,分装于小试管,121 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。

① 靛基质试验取可疑菌落或斜面培养物,接种于蛋白胨水培养基中,置35 培养2448 小时,必要时培养45 天,沿管壁加人靛基质试液数滴,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。
        
② 靛基质试液   称取对二甲氨基苯甲醛5g ,加入戊醇(或异戊醇)75ml ,充分振摇,使完全溶解后,再取盐酸25ml 徐徐滴入,边加边振摇,以免骤热导致溶液色泽变深.或称取对二甲氨基苯甲醛1g ,加人95 %乙醇95ml ,充分振摇,使完全溶解后,再取盐酸20ml 徐徐滴入。
5 .三糖铁琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨              20g

硫酸亚铁            0.2g

牛肉浸出粉          5g

硫代硫酸钠          0.2g

乳糖                10g

002%酚磺酞指示液   12.5ml

蔗糖                10g

琼脂                1215g

葡萄糖              1g

水                  1000ml

氯化钠              5g

 ( 2 )制法   除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1 ,加入琼脂,加热溶胀后,再加入其余成分,摇匀,分装,121 灭菌15 分钟,制成高底层(2 3cm ) 短斜面。
( 3 )用途  用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。

方法和结果观察:取可疑菌落或斜面培养物,做高层穿刺和斜面划线接种,置35 培养24 48 小时,观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性,斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性;底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
6.克氏双糖铁琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨              20g

枸橼酸铁            0.3g

牛肉浸粉            3g

硫代硫酸钠          0.3g

酵母浸粉            3g

002 %酚磺酞指示液  12 .5ml

乳糖                10g

琼脂                1215g

葡萄糖              1g

水                  1000ml

氯化钠               5g
( 2 )制法   除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外,取上述成分,混合,加热使溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1 , 加入琼脂,加热溶胀后,再加入其余成分,摇匀,分装,121 灭菌15 分钟,制成高底层(23cm )短斜面。
( 3 )用途  用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。

方法和结果观察:取可疑菌落或斜面培养物,做高层穿刺和斜面划线接种,置35 培养2448 小时,观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性,斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性,斜面层呈红色为乳糖发酵阴性;底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
7.脲(尿素)培养基
( 1 )成分

蛋白胨                   1g

 0.2 %酚红溶液          6ml

葡萄糖                   1g

20%无菌脲溶液            l00ml

氯化钠                   5g

水                       1000ml

磷酸氢二钾               2g
( 2 )制法  除脲溶液外,取上述成分,混合,调pH 值使灭菌后为6.9 0.1 ,混匀后,121 灭菌15 分钟,冷至50 55 ,加人无菌脲溶液(经膜除菌过滤),混匀,分装于灭菌试管中。
( 3 )用途   用于鉴别细菌的尿素酶反应。

方法和结果观察:取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内,置35 培养24 小时,观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性;不变色为阴性,阴性者需延长观察至1 周。
8 .苯丙氨酸琼脂培养基
( 1 )成分

磷酸氢二钠                            1g

氯化钠                                5g

酵母浸膏                              3g

琼脂                                  12 15g

DL-苯丙氨酸(DL -  phenylalanine )      2g (或L-苯丙氨酸)( 1g )

水                                    1000ml 
( 2 )制法   除琼脂外,取各成分溶于水,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1 ,再加入琼脂,加热溶胀,分装试管,121 灭菌15 分钟,制成长斜面。
( 3 )用途用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验(也称苯丙酮酸试验)。

方法和结果观察:取斜面培养物,大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面,置35培养4 小时或1824 小时,取45 10 %三氯化铁溶液试剂,由斜面上部流下,若出现墨绿色,即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性;倘若不变色则为阴性。
9.氨基酸脱羧酶试验培养基
( 1 )成分

    基础液

蛋白胨                      5g

1.6    %溴甲酚紫指示液        lml

酵母浸出粉                  3g

水                          1000ml

葡萄糖                      1g

② 氨基酸

L-赖氨酸                    0.5g (需加碱溶液溶解)

L-鸟氨酸                     0.5g(需加碱溶液溶解)

L-精氨酸                     0.5g(不需加碱溶液溶解)

( 2 )制法  先配制基础液备用;将溶解后的3 种氨基酸,各分别加至100ml 基础液(使氨基酸的终浓度为0.5 % ) ,混匀,调pH 值使灭菌后为6.8 。分装于小试管中,每管2.5ml 并滴加1 层液体石蜡;同时分装一部分基础液于小试管,作为对照培养基,均置116 灭菌10 分钟。
( 3 )用途  用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。
    
方法和结果观察:取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3 种培养基及基础液对照培养基,置35 培养24 48 小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸,试验培养基和对照培养基应呈黄色,继续培养时,试验培养基如呈紫色或紫红色,即为阳性反应;如至培养末期,培养基仍同对照管呈黄色,则判为阴性反应。
10.明胶培养基
( l )成分

蛋白胨         5g

明胶           120g

牛肉浸出粉     3g

水             1000ml
( 2 )制法   取上述成分加人水中,浸泡约20 分钟,加热溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1 ,分装于小试管中,121 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于细菌的明胶液化试验。

方法和结果观察:取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内,置35 培养24 小时,取出置冰箱内10 20 分钟。如培养基仍呈溶液状,则为阳性; 培养基重新凝固,则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢,如未见液化,需继续培养1 2 周方可确定阴性。
11 .丙二酸钠培养基
( 1 )成分

酵母浸出粉                1g

磷酸二氢钾                0.4g

氯化钠                    2g

丙二酸钠                  3g

葡萄糖                    0.25g

0.4 %溴麝香草酚蓝指示液  6ml

硫酸铵                    2g

水                        l000ml

磷酸氢二钾                0.6g
( 2 ) 制法   除指示液外,将上述成分溶解,调pH 值使灭菌后为6.8 ,再加入指示液。分装小管中.121 灭菌15分钟。
( 3 )用途  用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。
    
方法和结果观察:取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内,置35 培养48 小时.于24 小时和48 小时后各观察1 次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应;无颜色变化,或由绿色变成黄色,则为阴性反应。
12 .枸橼酸盐培养基
( 1 )成分

氯化钠                     5g

枸橼酸钠(无水)           2g

硫酸镁                     0.2g

1.0 %溴麝香草酚蓝指示液   10ml

磷酸氢二钾                 1g

琼脂                       14g

磷酸二氢铵                 1g

水                          l000ml
( 2 )制法  除指示液和琼脂外,取上述成分,混合,微温使溶解,调pH 值使灭菌后为6.9 0.1 ,加入琼脂,加热溶胀,然后加入指示液,混匀,分装于小试管中,121 灭菌15 分钟,制成斜面.
3 )用途  用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。
    
方法和结果观察:取可疑菌落或斜面培养物,接种于枸橼酸盐培养基的斜面上,一般培养48 72 小时,凡能在培养基斜面生长出菌落,培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应;无菌落生长,培养基仍绿色者为阴性反应,阴性反应者应继续培养观察至7 天。
13.硝酸盐胨水培养基
(1)成分

蛋白胨        10g

硝酸钾        2 g

酵母浸出粉    3g

水            1000ml
( 2 )制法  取上述成分,加热溶解,调pH 值使灭菌后为7.3 0.1 ,分装于小试管中,121 灭菌15 分钟。
( 3 )用途   用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。
    
方法和结果观察:取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中,置35 培养24 小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合,每个培养物加混合物0.1 ml,产生红色为阳性反应,不产生红色为阴性反应。

甲液:称取α-萘胺5g,溶解于5mol / L 醋酸l000ml 中。

乙液:称取磺胺酸(对氨基苯磺酸)8g ,溶解于5mol / L 醋酸1000ml 中。
14 .石蕊牛奶培养基
( l )成分

脱脂奶粉       10g

水             100ml

10 %石蕊溶液  0.65ml
( 2 )制法   取上述成分混匀后,分装于小试管中.116 灭菌10 分钟,
( 3 )用途   用于检查细菌对牛奶的凝固和发酵作用。
15.半固体营养琼脂培养基
( l )成分

蛋白胨        10g

琼脂          4g

牛肉浸出粉    3g

水            l000ml

氯化钠        5g
( 2 )制法除琼脂外,取上述成分,混合,微温使溶解,调pH 值使灭菌后为7.2 0.2 ,再加入琼脂,加热溶胀,分装于小管中,121 灭菌15 分钟后,直立放置。待凝固后备用
( 3 )用途  用于观察细菌的动力,也可用于一般菌种的保存。

细菌动力检查:取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中,置35 培养24小时,细菌沿穿刺外周扩散生长.为动力阳性;否则为阴性。阴性者,应再继续培养观察2 3 天。 

 

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