木腐菌菌种保藏（饲木法）技术规程

      木腐菌是一大类能侵蚀、分解树木或木材细胞，并吸收营养和破坏结构，导致树木和木材腐朽的真菌。在自然界中，木腐菌在森林物质转换和能量平衡方面发挥关键作用；此外，作为木材防腐技术研究的实验材料之一，可用于防腐剂筛选、效果检验和防腐机理等研究。目前，对木腐菌的利用研究已扩大到生物制浆造纸、饲料蛋白、抗癌药物和环境净化等领域。

      制订木腐菌菌种保藏技术规程，对于保持菌种的活力、菌种资源的规范和安全保存、科学研究及合理利用都具有重要意义和作用。

 

1   范围

本规程规定了木腐菌菌种保藏（饲木法）的基本原则、技术要求及方法。

本规程适用于各类木腐菌菌种的保藏。

2           术语与定义

木腐菌  wood-decay  fungi

木腐菌是一大类能侵蚀或分解树木或木材细胞，并吸收营养和破坏结构，导致树木

和木材腐朽的真菌。主要引起树木白腐、褐腐、软腐和木材表面变色等。

3           原理

木腐菌菌种的保藏原理，是通过低温、干燥、隔绝空气和断绝营养等手段，最大限度地降低菌株的代谢强度，抑制其生长和繁殖，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而保持菌种原有的性状并延长保藏时间。木腐菌菌种的保藏方法有斜面低温保藏法、饲木低温保藏法和液氮超低温保藏法等。

木材具有木腐菌所必需的纤维素、半纤维素和木质素等全营养物质，因此饲木法保藏有利于保持木腐菌原有的特性和腐朽活力，且保藏时间较长和操作简单。但对饲木的选材较严，制作成本较高，保藏占用空间也较大。

4   技术要求

4.1   不同菌种应根据要求选择适合的培养基进行培养。

4.2    接种须无菌操作，避免杂菌污染。

4.3    定期检查

4.4     保藏期间要定期检查保藏菌种的冰箱温度和湿度；检查保藏器皿的棉塞有无生霉现象，如发现异常则立即取出该管重新纯化，经培养后补上空缺；在低倍解剖镜下抽样检查有无螨虫等害虫，发现时须及时消除。

5方法与步骤

5.1 保藏设备和材料

4℃冰箱、超净工作台、高压消毒器、菌种培养箱、三角瓶、马尾松边材、麦芽糖液、琼脂粉等。

5.2 饲木的选择

5-8年树龄、健康无缺陷、无变色的马尾松边材。

5.3 饲木的制备

饲木取自原木段横截面均匀分布处，各面要求平整、没有缺陷，尺寸大小为5mm×5mm×5mm(纹理方向)。

5.4 麦芽糖（饴糖或马铃薯－蔗糖）琼脂培养基制备

在300ml细口三角瓶中加入麦芽糖液（波美氏比重1.03）80ml,琼脂1.5  ～  2.0％，瓶口塞棉塞并包防水纸，灭菌（0.1MPa，30min）。

(注：可用离心管等其它容器代替三角瓶，根据所选容器的容量，培养液的量也应做相应调整。)

5.5 接种培养

培养基冷却凝固后，在无菌条件下接种木腐菌，置于培养箱内培养，温度28±2℃，相对湿度75%，时间7--10天。

5.6 饲木的灭菌

在300ml细口三角瓶中加入饲木，数量约占瓶体的1/2，用蒸馏水将饲木表面均匀湿润，瓶口塞棉塞，并包防水纸，灭菌（0.1MPa，60min）。

5.7 饲木接种

待饲木冷却后，在无菌条件下将饲木放入已长满菌丝的三角瓶麦芽糖琼脂培养基内，数量为三角瓶容积的1/2--1/3。

5.8 培养

将三角瓶置于培养箱或培菌室内培养，温度28±2℃，相对湿度75%，时间为10-15天。

5.9   低温保藏

待菌丝面积占饲木表面积的 3/4 左右时，将三角瓶置于 4℃的冰箱中保藏。

5.10 保藏时间

一般为3年以上。