革兰阴性杆菌分离培养基——肠杆菌分离培养基

［用途］

分离肠道菌的弱选择性培养基

[配法]〕

肉膏汤琼脂（pH 7.4) 1L , 10g / L 中国蓝溶液（灭菌）10 ml，乳糖10g , 10g / L 蔷薇红酸乙醇溶液10ml。取乳糖10g 置于已灭菌的肉膏汤琼脂瓶内，加热溶解琼脂并混匀。待冷却至50 ℃ 左右，加入中国蓝、蔷薇红酸乙醇溶液混匀，立即倾注平板，凝固后备用。

[用法]

将标本接种平板，置35 ℃ 18-24h 。分解乳糖产酸的细菌，其菌落呈蓝色；不分解乳糖的细菌，菌落为淡红色的透明菌落。

[质量控制]

大肠埃希菌ATCC 25922 菌落呈蓝色；痢疾志贺菌I型ATCC 13313 和鼠伤寒沙门菌ATCC 13311 菌落呈淡红色。

[保存]

4 ℃ 冰箱保存，1 周内用完。

注：

(1)中国蓝溶液需煮沸或115℃ 灭菌15min后应用。蔷薇红酸乙醇溶液无需灭菌，但加热时应避开火焰

(2)蔷薇红酸能抑制革兰阳性细菌生长，但对大肠埃希菌没有抑制作用，标本接种量不直太多

(3)此培养基pH7.4 ，应呈淡红色。若过碱呈鲜红色，过酸则呈蓝色，均不适用。2 木糖、赖氨酸、去氧胆酸盐（XLD ）培养基

[用途]

为肠道菌选择性培养基

［配法］

酵母浸膏3g , L-赖氨酸5g，氯化钠5g，D-木糖3.75g，乳糖7.5g，蔗糖7.5g，去氧胆酸钠2.5g，硫代硫酸钠6.8g , 枸椽酸铁钱0.8g ，琼脂13.5g，1 ％酚红溶液8ml，蒸馏水1L 。

将上述成分（酚红除外）混合，加热溶解，校正pH 至7.2 ，再加入酚红溶液混匀。121 ℃ 高压灭菌15min 倾注平板备用。

[用法]

将标本划线接种平板，置35 ℃ 培养18-24h 。大肠埃希菌、肠杆菌属、克雷伯菌属、枸椽酸杆菌属细菌可形成黄色、不透明菌落；大多数沙门菌属细菌因不利用糖类，为半透明红色或无色菌落。

[质量控制]

大肠埃希菌呈黄色菌落；宋内志贺菌呈无色菌落；伤寒沙门菌呈红色菌落有黑心；金黄色葡萄球菌抑制生长。

[保存］

贮存于4 ℃ 有效期5 天。

3.SS 琼脂

[用途］

沙门菌属和志贺菌属（Salmonella-Shigella ）的分离培养

[配法]

月示胨5g ，牛肉膏5g ，乳糖10g ，琼脂巧15-20g ，胆盐（No.3 ) 3.5g，枸椽酸钠8.5g，硫代硫酸钠8.5g，枸椽酸铁1g , 1 ％中性红溶液2.5ml，0.1 ％煌绿溶液0.33ml，蒸馏水1L

将上述成分（除中性红、煌绿外）混合于水中，加热煮沸溶解，校正pH 至7.0-7.1 ，然后加入中性红和煌绿溶液，充分混匀冷却至50 ℃ 时倾注平板。

[用法]

将标本接种平板，置35 ℃ 培养18-24h 。沙门菌属菌落呈无色半透明，产生硫化氢者菌落中心呈黑色；志贺菌属的菌落呈无色半透明；大肠菌属呈红色浑浊；宋内志贺菌能延缓发酵乳糖，培养24h 后可以出现红色菌落。肠道致病菌的菌落直径均可达1.5mm以上。

[质量控制]

大肠埃希菌菌落呈红色；痢疾志贺I型、福氏志贺菌和伤寒沙门菌生长良好，菌落无色；肠炎或猪霍乱沙门菌菌落呈黑色；粪肠球菌、金黄色葡萄球菌不生长。

[保存]

避光，3 天内用完。

注：

煌绿要新配，中性红要优质。

4 麦康凯琼脂

［用途］

麦康凯琼脂（Maconkey agar）用于肠道致病菌的分离培养和非发酵细菌鉴别。

[配法]

蛋白胨20g，氯化钠5g，胆盐（猪、牛、羊）5g，乳糖10g ，琼脂15-20g , 1％中性红溶液5ml，蒸馏水1L。

将上述成分（除中性红外）称量加入水中，加热溶解，校正pH 至7.2 ，加入中性红溶液，分装灭菌115℃ 20min ，冷却至50 ℃ 左右时倾注平板。

[用法]

取标本或增菌培养物接种平板，置35 ℃ 培养18-24h 。不发酵乳糖的肠道细菌呈无色菌落，直径约2.0mm左右，光滑半透明。

[质量控制]

大肠埃希菌菌落呈桃红色；痢疾志贺菌菌落呈无色；伤寒沙门菌菌落无色；金黄色葡萄球菌不生长。

[保存］

置4 ℃ 冰箱（避光）, 1 周内用完。

注：非发酵细菌在该平板上是否生长，是临床鉴定某些非发酵细菌的指标之一。5 伊红美蓝琼脂

[用途]

用于肠道致病菌及大肠菌群分离培养

[配法]

蛋白胨10g ，乳糖10g ，磷酸氢二钾2g , 20g / L 伊红Y 溶液20ml，6.5g / L 美蓝溶液10ml，琼脂17g ，蒸馏水1L。

将蛋白胨、磷酸盐、琼脂称量混合于水中，并加热煮沸溶解，校正pH 至7.1 ，分装121 ℃ 灭菌15min备用。临用时加热溶化琼脂加入乳糖，冷至50-55 ℃ 时加入伊红和美蓝溶液，摇匀倾注平板。

[用法]

取粪便标本或增菌培养物接种平板，置35 ℃ 培养18-24h 。根据检验目的不同，挑取无色菌落或挑选紫红色及有金属光泽的菌落转种克氏双糖或三糖铁琼脂进行鉴定。

[质量控制]

大肠埃希菌菌落呈紫红色，有时有金属光泽，直径＞2.3mm；伤寒沙门菌菌落呈灰白色，直径＞1.8mm；金黄色葡萄球菌不生长。

[保存]

置4 ℃ 冰箱，1 周内用完。

6 克氏双糖铁琼脂

[用途]

克氏双糖铁琼脂（Klinger iron agar）用于肠杆菌科细菌的初步鉴定。

[配法]

蛋白胨20g ，牛肉膏3g ，酵母膏3g ，乳糖10g ，葡萄糖1g ，氯化钠50g ，枸椽酸铁铵0.5g，硫代硫酸钠0.5g，0.2 % 酚红溶液5ml，琼脂12ml，蒸馏水1L。

将前8种成分称量混合于水中，加热溶解，校正pH 至7.5 ，再加入琼脂和酚红溶液，煮沸溶解分装试管每管4ml，经115℃ 灭菌20min ，立即制成高层斜面，待凝固后经无菌试验备用。

[用法]

取待检菌纯培养物，用接种针作底层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养18-24h ，观察结果。斜面变黄，底层变黄，产气者或不产气者多属大肠埃希菌群及发酵乳糖的菌株。斜面变红，底层变黄，为不发酵乳糖菌株。产硫化氢菌株可使底层或全管产生黑色反应。

[质量控制]

奇异变形杆菌K / A 硫化氢阳性；大肠埃希菌A / A ；志贺痢疾杆菌K / A ；伤寒沙门菌K / A 硫化氢阳性；铜绿假单胞菌K / K。

［保存］

置4 ℃ 冰箱，2 周内用完

注：该培养基pH 值尤为重要，pH 7.5 时使用效果最佳

7.三糖铁琼脂

[用途］

用于肠杆菌科细菌初步生化鉴定。

[配法]

蛋白胨15g，月示胨5g ，牛肉膏3g ，酵母膏3g ，乳糖10g ，蔗糖10g，葡萄糖1g ，氯化钠5g，硫酸亚铁2g / L 硫代硫酸钠0.3g , 0.2 ％酚红溶液5ml，琼脂12g ，蒸馏水1L

将前10 种成分称量混合于水中，加热溶解后校正pH 至7.4 ，再加琼脂及酚红溶液，加热煮沸溶解。分装试管，每管4ml，经115 ℃ 灭菌20min ，立即置高层斜面，待凝固后，经无菌试验备用。

[用法]

取待检菌纯培养物，用接种针作底层穿刺和斜面划线接种，置35 ℃ 培养18-24h 观察结果。发酵乳糖或蔗糖的菌可使斜面及底层均变黄色。不发酵乳糖和蔗糖的细菌仅发酵葡萄糖时使底层变黄，斜面变红。产生硫化氢的菌株可使底层或整个培养基呈黑色。分解乳糖或蔗糖后产气时有些菌株还能使培养基断裂。

［质量控制］

伤寒沙门菌K / A ，硫化氢阳性；副伤寒沙门菌K / A ，硫化氢阳性；痢疾志贺菌K / A ；大肠埃希菌A / A ; 普通变形杆菌A / A ，硫化氢阳性；铜绿假单胞菌K / K

［保存］置4 ℃ 冰箱，2 周内用完

注：该培养基pH 7.5 时使用效果最佳

8.山梨醇麦康凯琼脂

[用途] 用于致病性、侵袭性和产毒性大肠埃希菌分离培养]

[配法]

蛋白胨5g，月示胨3g ，氯化钠5g，胆盐（猪、牛、羊）5g，山梨醇10g ，琼脂粉12g ，0.1g / L 结晶紫溶液lml，5g / L 中性红溶液5 ml，蒸馏水1L

将前4 种成分混合于水中，加热溶解，校正pH 至7.2 ，再加入琼脂粉加热煮沸溶解。分装三角烧瓶100 ml经121 ℃ 15min 灭菌备用。临用时，加热溶解，再加山梨醇、结晶紫及中性红溶液，摇匀倾注平板。

[用法]

将标本或增菌液接种平板，置35 ℃ 培养18-24h 。与麦康凯琼脂不同之处是挑取致病性大肠埃希菌菌落时以无色菌落为主，同时兼取红色菌落，如EPEC 迟缓分解山梨醇，菌落呈红色。EHEC 0157：H7菌落无色。

[质量控制]

参照麦康凯琼脂

[保存]

置4 ℃ 冰箱，1 周内用完。

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